森林脑炎病毒E蛋白DomainⅢ的串联表达、纯化及其多克隆抗体的制备

作     者：付明月 吴月 陈子杨 常东英 王清爽 常军亮 FU Mingyue;WU Yue;CHEN Ziyang;CHANG Dongying;WANG Qingshuang;CHANG Junliang

作者机构：长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130012 长春理工大学吉林长春130012 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第6期

页      面：657-662页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：吉林省省级医药健康产业发展专项(20170311010YY) 

主　　题：E蛋白 DomainⅢ 串联表达 多克隆抗体 森林脑炎病毒 

摘      要：目的串联表达、纯化森林脑炎病毒(tick-borne encephalitis virus,TBEV)E蛋白DomainⅢ(EDⅢ),并制备多克隆抗体。方法Trizol法提取TBEV RNA,反转录为cDNA,以其为模板PCR扩增EDⅢ基因片段,采用重叠PCR法将2段EDⅢ基因片段通过疏水性柔性多肽(G_(4)S)_(3)连接为融合基因,与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建重组表达质粒pET-28a-2EDⅢ,经测序鉴定后,转化至*** BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni^(2+)亲和层析纯化。以复性后的重组蛋白为免疫原,免疫雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体,间接ELISA法检测效价,Western blot法鉴定特异性。利用DNAMAN软件分析TBEV与其他黄病毒EDⅢ氨基酸序列同源性。结果重组质粒pET-28a-2EDⅢ经测序鉴定,扩增序列包含2段与GenBank上登录的TBEV“森张株(JQ650523.1)E序列一致的基因,证明质粒构建正确。诱导表达的重组2EDⅢ蛋白相对分子质量约21000,主要以包涵体形式存在,纯度可达97.5%。兔抗2EDⅢ血清多克隆抗体效价为1∶107,可与TBEV全病毒发生特异性反应。经DNAMAN软件比对,TBEV与日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)、黄热病病毒(yellow fever virus,YFV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)EDⅢ氨基酸序列同源性分别为36.56%、9.28%、30.77%。结论成功构建了TBEV EDⅢ串联重组表达质粒pET-28a-2EDⅢ,表达的重组2EDⅢ蛋白具有良好的反应性和免疫原性,制备的多克隆抗体效价较高。