大鼠去分化脂肪细胞的天花板培养法和滤网培养法比较

作     者：陈晨 刘鑫 刘舸 范旭 杨屹 Chen Chen;Liu Xin;Liu Ge;Fan Xu;Yang Yi

作者机构：中国医科大学附属盛京医院小儿泌尿外科沈阳110004 

出 版 物：《临床小儿外科杂志》 (Journal of Clinical Pediatric Surgery)

年 卷 期：2023年第22卷第1期

页      面：72-78页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81701531) 

主　　题：细胞培养技术 去分化脂肪细胞 原代细胞培养 大鼠 

摘      要：目的探讨大鼠去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞天花板培养法和滤网培养法的差异,为DFAT细胞的原代培养提供研究基础。方法从8只4~6周SD(Sprague Dawley)大鼠腹股沟脂肪垫中分离出成熟脂肪细胞,应用天花板培养法和滤网培养法体外去分化培养获得DFAT细胞,比较DFAT细胞形态、生长至首次传代需要的时间和完全培养基量,并通过流式细胞分析和细胞免疫荧光比较DFAT细胞纯度和体外诱导分化为平滑肌细胞的潜能。结果两种方法培养的DFAT细胞均呈成纤维样、梭形、峰谷样排列。天花板培养法和滤网培养法培养DFAT细胞生长至首次传代需要的时间分别为(16.00±1.41)d和(16.25±0.96)d,差异无统计学意义(P0.05)。两种方法培养的DFAT细胞表面抗原表型均为CD29^(+)CD90^(+)CD31^(-)CD45^(-),天花板培养法培养的DFAT细胞流式细胞分析结果为CD29^(+)(97.63±3.15)%、CD90^(+)(98.63±0.83)%、CD31^(+)(0.11±0.12)%、CD45^(+)(0.18±0.11)%;滤网培养法培养的DFAT细胞流式细胞分析结果为CD29^(+)(96.93±3.61)%、CD90^(+)(98.65±0.84)%、CD31^(+)(0.16±0.13)%、CD45^(+)(0.16±0.10)%,差异均无统计学意义(P0.05)。天花板培养法和滤网培养法培养的DFAT细胞在体外经诱导后均可分化为平滑肌细胞,表达α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,αSMA)和平滑肌肌球蛋白重链(smooth muscle myosin heavy chain,SMMHC),αSMA阳性细胞率分别为(73.67±8.04)%、(73.56±8.44)%,差异无统计学意义(P0.05)。天花板培养法培养DFAT细胞生长至首次传代较滤网培养法需要更多的完全培养基,分别为93.75(90.00,93.75)mL、48.50(48.50,48.50)mL,差异有统计学意义(P0.05)。结论天花板培养法和滤网培养法培养DFAT细胞在时间成本、细胞形态、细胞纯度及体外诱导分化为平滑肌细胞的潜能方面均无显著差异,但从经济成本考虑,滤网培养法稍有优势。