灵芝漆酶在黑曲霉中的分泌表达及性质研究

作     者：刘雨 于涛 张宇鑫 张会 刘天奇 李杰 LIU Yu;YU Tao;ZHANG Yuxin;ZHANG Hui;LIU Tianqi;LI Jie

作者机构：东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 内蒙古昆明卷烟有限责任公司内蒙古呼和浩特010000 

出 版 物：《食品工业科技》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期：2023年第44卷第13期

页      面：119-126页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 08[工学] 0703[理学-化学] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 

基　　金：国产雪茄烟生物发酵技术研究(202115010534-JS-178) 

主　　题：漆酶 黑曲霉 异源表达 酶学性质 染料脱色 

摘      要：前期通过分泌蛋白质谱分析和转录组测序,确定了一株高产漆酶的白腐菌为灵芝,其分泌漆酶的编码基因为lcc1。本研究PCR扩增lcc1基因的基因组序列(lcc1-D)和cDNA序列(lcc1-C),分别构建表达载体(pSZH6R-lcc1-D、pSZH6R-lcc1-C)。通过农杆菌介导法转化黑曲霉TH-2,筛选出在糖化酶基因glaA位点发生同源重组的纯合黑曲霉转化子。摇瓶发酵后取发酵液上清进行Native-PAGE检测和酶活测定,结果表明,重组菌株lcc1-C的漆酶表达量和酶活力高于lcc1-D,酶活力最高值分别为431.94 U/L和218.06 U/L。Real-time PCR结果表明,lcc1-C中的漆酶mRNA水平是lcc1-D的3.38倍。对重组漆酶进行酶学性质分析,发现其最适反应温度为60℃、最适p H为3.5。在染料脱色实验中发现重组漆酶对孔雀石绿、中性红、甲基橙具有明显脱色作用,介体存在时能增强漆酶对染料的脱色效果,对中性红脱色效率最强,48 h脱色率可达到91.21%。为改善重组漆酶的折叠,向重组菌株lcc1-C的发酵培养基中添加渗透调节剂,结果显示,在添加0.4 mol/L TMAO时酶活力达到1301.67 U/L,提高了1.97倍;在添加0.5 mol/L脯氨酸时酶活力达到2037.22 U/L,提高了3.64倍;在添加0.5 mol/L甘氨酸时酶活力达到1434.03 U/L,酶活力提高了2.27倍。