微小RNA-30a-5p激活Wnt/β-连环蛋白信号通路对胃癌细胞增殖与侵袭的作用机制

作     者：黄海 李文 张明凯 孙宗科 李燕彬 郭志远 李玉明 Huang Hai;Li Wen;Zhang Minghai;Sun Zongke;Li Yanbin;Guo Zhiyuan;Li Yuming

作者机构：滨州医学院附属医院胃肠外科滨州256600 滨州市人民医院临床营养科滨州256600 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2023年第40卷第5期

页      面：863-866页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：山东省自然科学基金面上项目(ZR2019MH080) 

主　　题：胃癌 微小RNA Wnt/β-连环蛋白 银杏双黄酮 

摘      要：目的探讨人微小RNA(has-miR)-30a-5p调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对胃癌细胞增殖及侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养胃癌MKN45细胞;在所研究胃癌细胞系中使用小干扰RNA(siRNA)转染建立miR-30a-5p的敲除和过表达模型,胃癌MKN-45细胞分为3组:miR-30a-5p小干扰RNA(miR-30a-5pinhibitor)组,miR-30a-5p过表达RNA组和空白对照组(NC),荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Westernblot)检测Wnt/β-catenin信号通路相关标志物CyclinD1(CCND1)基因的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-30a-5p与Wnt信号通路下游关键基因CCND1的靶向调节关系;在培养的胃癌细胞MKN-45中加入Wnt/β-catenin信号通路抑制剂-银杏双黄酮,分为miR-30a-5pinhibitor组、miR-30a-5pinhibitor+银杏双黄酮组、miR-30a-5pInhibitorNC组及miR-30a-5pInhibitorNC+银杏双黄酮组,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证各组细胞的增殖能力,细胞迁移实验(Transwell)验证各组细胞的侵袭能力。各组间比较采用t检验。结果qPCR实验结果显示过表达miR-30a-5p能够显著抑制CCND1在mRNA的表达(0.58±0.05,t=11.39,P0.01),Westernblot实验结果显示,CCND1蛋白水平,miR-30a-5pinhibitor组较NC组明显上升(284437±2127比215273±4097,t=25.95,P0.01),miR-30a-5pmimics组较NC组明显下降(85586±309比197661±948,t=194.70,P0.01);双荧光素酶实验结果显示过表达miR-30a-5p后野生组中WNT信号通路活性较对照组显著降低(0.39±0.03,t=13.96,P0.01);CCK-8结果显示2d后miR-30a-5pinhibitor+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5p inhibitor组[(93.09±4.18)%比(146.42±5.80)%,t=12.92,P0.01];miR-30a-5p Inhibitor NC+银杏双黄酮组细胞抑制率明显高于miR-30a-5pInhibitorNC组[(53.80±3.54)%比(100.00±2.18)%,t=19.25,P0.01]。Transwell结果显示miR-30a-5pinhibitor+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5pinhibitor组[(63.67±9.61)个比(100.00±10.44)个,t=4.44,P0.05];miR-30a-5pInhibitorNC+银杏双黄酮组穿膜细胞量明显低于miR-30a-5pInhibitorNC组[(19.33±6.66)个比(45.00±4.58)个,t=5.50,P0.01]。结论miR-30a-5p可以调控Wnt/β-catenin信号通路,过表达miR-30a-5p后可抑制Wnt/β-catenin信号通路降低胃癌细胞中CyclinD1(CCND1)的表达,进一步影响胃癌的增殖与侵袭。