烯醇化酶抑制剂对大鼠脊髓损伤后自噬及运动功能的影响

作     者：周志强 吴杰 安瑶瑶 解国辉 杨晓慧 张钦 Zhou Zhiqiang;Wu Jie;An Yaoyao;Xie Guohui;Yang Xiaohui;Zhang Qin

作者机构：长治医学院附属运城市中心医院脊柱外科运城044000 长治医学院附属运城市中心医院科研科运城044000 长治医学院附属运城市中心医院影像科运城044000 

出 版 物：《中华创伤杂志》 (Chinese Journal of Trauma)

年 卷 期：2023年第39卷第5期

页      面：450-458页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：山西省自然科学基金(201901D111472)。 

主　　题：脊髓损伤 自噬 大鼠 烯醇化酶 

摘      要：目的探讨烯醇化酶(Enolase)抑制剂(ENOblock)对大鼠脊髓损伤后调控自噬相关蛋白表达及促进运动功能的影响。方法选取160只雌性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA)自噬抑制剂处理组(3⁃MA组)、脊髓损伤组及ENOblock处理组(ENOblock组),每组40只。假手术组行背部椎板切除,但不损伤脊髓。3⁃MA组、脊髓损伤组和ENOblock组采用改良Allen法打击装置损伤T8脊髓,建立脊髓损伤模型。3⁃MA组和ENOblock组分别在伤后立即向鼠尾静脉推注3⁃MA(2.5 mg/kg)和ENOblock(100μg/kg)。假手术组和脊髓损伤组向鼠尾静脉推注等剂量的等渗氯化钠溶液。伤后1,3,7,14,21 d采用BBB评分评估各组双下肢运动功能。伤后3 d采用免疫印迹法检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)⁃Ⅱ和LC3⁃Ⅰ比值、自噬效应蛋白(Beclin⁃1)和多泛素结合蛋白(p62)的表达量。伤后7 d采用免疫荧光法检测各组脊髓组织损伤区域LC3⁃Ⅱ和Beclin⁃1的阳性细胞。伤后3 d采用RT⁃PCR检测各组脊髓组织损伤区域Beclin⁃1和Enolase mRNA的表达量。结果与假手术组[各时间点均为(21.0±0.0)分]比较,伤后1,3,7,14,21 d 3⁃MA组[(1.4±1.1)分、(2.4±0.9)分、(3.8±1.8)分、(7.6±1.1)分、(9.0±2.1)分]、脊髓损伤组[(0.8±0.5)分、(1.8±0.9)分、(3.6±0.9)分、(6.2±1.3)分、(8.0±0.7)分]和ENOblock组[(2.0±0.9)分、(2.2±0.8)分、(4.8±1.1)分、(10.6±1.5)分、(13.2±0.8)分]BBB评分降低(P均0.05)。免疫荧光染色结果显示,伤后7 d 3⁃MA组和ENOblock组LC3⁃Ⅱ和Beclin⁃1阳性细胞比脊髓损伤组少。RT⁃PCR检测结果显示,与假手术组(0.25±0.06、0.29±0.03)比较,伤后3 d脊髓损伤组(1.08±0.16、0.98±0.17)Beclin⁃1和Enolase mRNA表达量升高(P均0.05)。结论大鼠脊髓损伤后,神经元自噬活性明显增加,ENOblock可通过调控自噬相关蛋白的表达抑制神经元自噬并促进大鼠运动功能的恢复。