MASH1介导肾上腺髓质嗜铬细胞发生神经元转分化

作     者：彭婀敏 胡成平 冯俊涛 贺若曦 PENG Emin;HU Chengping;FENG Juntao;HE Ruoxi

作者机构：中南大学湘雅医院国际医疗部门诊长沙410008 中南大学湘雅医院呼吸内科国家呼吸疾病临床重点专科国家呼吸系统疾病临床医学研究中心分中心长沙410008 中南大学湘雅医院呼吸中心长沙410008 湖南省呼吸疾病临床医学研究中心长沙410008 

出 版 物：《中南大学学报（医学版）》 (Journal of Central South University ：Medical Science)

年 卷 期：2023年第48卷第4期

页      面：526-537页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81400022) 湖南省自然科学基金(2020JJ5897,2020JJ4904) 

主　　题：MASH1 嗜铬细胞 神经元 神经生长因子 地塞米松 转分化 

摘      要：目的:肾上腺髓质嗜铬细胞(adrenal medulla chromaffin cells,AMCCs)在神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导下向神经元转分化,引起肾上腺素分泌减少,其可能参与了支气管哮喘的发病。神经分化发育的关键因子哺乳动物无刚毛-鳞甲同源物(mammalian achaete scute-homologous 1,MASH1)在神经元转分化的AMCCs中升高。本研究拟探讨MASH1对AMCCs神经元转分化的影响及机制。方法:分离并培养大鼠AMCCs,用siMASH1、MASH1过表达质粒转染,再用NGF和/或地塞米松、MAPK激酶-1抑制剂PD98059刺激48 h。在光镜及电镜下观察AMCCs形态。用免疫荧光法检测酪氨酸羟化酶和肾上腺素合成关键酶苯乙醇胺-N-甲基转移酶(phenylethanolamine-N-methyltransferase,PNMT)水平,蛋白质印迹法检测AMCCs中PNMT、MASH1、外周蛋白、细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)及磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,pERK)、JMJD3的蛋白质水平,Real-time RT-PCR法检测MASH1、JMJD3的mRNA水平,ELISA法检测细胞上清液中肾上腺素水平。结果:培养的细胞经免疫荧光染色示酪氨酸羟化酶和PNMT均为阳性,鉴定为AMCCs。NGF处理后AMCCs出现细胞突起,pERK、外周蛋白、MASH1蛋白表达量均显著上升(均P0.05);PNMT蛋白表达和肾上腺素分泌水平下降(均P0.01)。MASH1干扰逆转了NGF的作用,使AMCCs中PNMT蛋白和肾上腺素水平升高,外周蛋白及细胞突起数量减少(P0.01)。过表达MASH1可使细胞突起、外周蛋白表达量显著增加(均P0.01),PNMT蛋白和肾上腺素水平下降(均P0.01)。与NGF组对比,NGF+PD98059组AMCCs中MASH1、JMJD3蛋白及mRNA水平均下降(均P0.05)。经过PD98059和地塞米松处理后,NGF促进AMCCs转分化的作用受到抑制,细胞突起数量及肾上腺素水平均下降(均P0.05);此外,NGF激活的pERK/MASH1通路活性也受到抑制。结论:MASH1是AMCCs发生神经元转分化的关键因子,NGF可能通过pERK/MASH1通路诱导转分化。