长链非编码RNA MIAT在2型糖尿病合并冠心病患者血清中的水平及对高糖诱导的心肌细胞损伤的影响

作     者：孟宪杰 刘蕊 曹丽慧 马宁 刘肖 MENG Xianjie;LIU Rui;CAO Lihui;MA Ning;LIU Xiao

作者机构：唐山市人民医院内分泌科河北省唐山市063000 唐山市人民医院急诊科河北省唐山市063000 唐山市人民医院心内科河北省唐山市063000 

出 版 物：《中国动脉硬化杂志》 (Chinese Journal of Arteriosclerosis)

年 卷 期：2023年第31卷第6期

页      面：481-490页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：河北省医学科学研究课题计划(20221812) 

主　　题：冠心病 2型糖尿病 心肌梗死相关转录本 microRNA-150-5p 心肌细胞 

摘      要：[目的]探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本(lncRNA MIAT)在2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者中的血清水平及其对高糖(HG)诱导的心肌细胞损伤的影响。[方法]选取2021年6月—12月于唐山市人民医院就诊的100例单纯T2DM患者作为T2DM组,100例单纯冠心病(CHD)患者作为CHD组,100例T2DM合并CHD患者作为T2DM+CHD组,另外选取100例健康人群作为对照组。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血液MIAT、microRNA-150-5p(miR-150-5p)的水平。体外培养人心肌细胞系AC16细胞,分为NG组(5.5 mmol/L正常葡萄糖)、HG组(30 mmol/L高葡萄糖)、HG+MIAT敲低阴性对照(HG+si-NC)组、HG+MIAT敲低(HG+si-MIAT)组、HG+si-MIAT+miR-150-5p抑制剂阴性对照(HG+si-MIAT+anti-NC)组、HG+si-MIAT+miR-150-5p抑制剂(HG+si-MIAT+anti-miR-150-5p)组,RT-qPCR检测细胞中MIAT和miR-150-5p的表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,Western blot检测细胞周期蛋白D2(CCND2)、B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、剪切的Caspase-3(cleaved Caspase-3)的蛋白表达,双荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)和RNA pull down分析miR-150-5p与MIAT、CCND2的靶向关系。[结果]与对照组、CHD组、T2DM组相比,T2DM+CHD组MIAT表达水平显著升高,分别增加了2.69倍、1.71倍、1.42倍(均P0.05),miR-150-5p的表达显著降低,分别降低了68.63%、60.49%、46.67%(均P0.05);相关性分析结果显示,T2DM+CHD患者中MIAT与miR-150-5p的表达水平呈负相关(r=-0.662,P0.001)。与NG组相比,HG组AC16细胞中MIAT的表达增加了3.54倍,细胞凋亡率、LDH含量、Bax蛋白水平和cleaved Caspase-3/Caspase-3比值分别增加了5.22倍、2.19倍、2.90倍和3.83倍,miR-150-5p表达降低了75.00%,细胞增殖活性在24、48、72 h时分别降低了49.02%、52.38%、49.48%,CCND2和Bcl-2蛋白水平分别降低了72.62%和78.26%(均P0.05);敲低MIAT使miR-150-5p表达增加了3.46倍,减轻HG诱导的AC16细胞损伤并使细胞凋亡率降低了65.73%(均P0.05);抑制miR-150-5p可显著减弱敲低MIAT对HG诱导的AC16细胞损伤的影响(P0.05);MIAT靶向负调节miR-150-5p表达,CCND2是miR-150-5p的靶基因。[结论]T2DM合并CHD患者血清MIAT水平升高;MIAT敲低可能通过调节miR-150-5p来拮抗HG诱导的人心肌细胞的损伤。