多黏菌素B通过下调NF-κB抑制HBV转录复制的机制研究

作     者：孟凡荣 陈琛 潘红丽 李雪冰 MENG Fanrong;CHEN Chen;PAN Hongli;LI Xuebing

作者机构：天津医科大学总医院妇产科天津市女性生殖健康与优生重点实验室天津300052 天津市肺癌转移与肿瘤微环境重点实验室天津市肺癌研究所天津医科大学总医院肺部肿瘤外科天津300052 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2023年第39卷第5期

页      面：827-837页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(No.82273019) 中国癌症基金会重点项目(No.CFC2020kyxm003) 天津市医学重点学科(专科)建设项目(No.TJYXZDXK-061B No.TJYXZDXK-031A) 天津市肺癌研究所面上项目(No.TJLCMS2021-03) 天津医科大学总医院孵育基金(No.ZYYFY2019022) 

主　　题：多黏菌素B 乙型肝炎病毒 核因子κB 转录 启动子 

摘      要：目的:研究多黏菌素B通过下调核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转录和复制的影响。方法:通过MTT法检测多黏菌素B在HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞中的细胞毒性;使用10、50和100 nmol/L的多黏菌素B处理HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞,通过RT-qPCR方法检测细胞中HBV RNA和HBV DNA水平,ELISA方法检测细胞上清中乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)和乙型肝炎e抗原(hepatitis B e antigen,HBeAg)水平,明确多黏菌素B对HBV的调控作用。利用转录组测序筛选多黏菌素B调控HBV转录复制的效应分子NF-κB;同时检测敲减及过表达NF-κB对HBV的调控作用;利用双萤光素酶报告基因实验检测NF-κB对Cp、Xp、Sp1和Sp2启动子活性的影响;利用回补实验探究多黏菌素B调控HBV转录复制是否依赖于NF-κB。结果:MTT实验结果显示,浓度低于100μmol/L时,多黏菌素B对HepG2-NTCP、HepAD38、HepG2.2.15、HepG2、Huh-7和PLC/PRF/5细胞无明显毒性。在10、50和100 nmol/L的浓度下,多黏菌素B呈浓度依赖性抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞和HBV稳定复制的HepG2.2.15细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平。通过转录组测序发现,多黏菌素B可以显著抑制HBV感染的HepG2-NTCP细胞中NF-κB的表达水平;进一步,过表达NF-κB显著上调HBV感染的HepG2-NTCP细胞中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg和HBeAg水平,沉默时则相反;同时,双萤光素酶报告基因实验显示NF-κB可增强HBV Sp2启动子活性。回补实验发现多黏菌素B调控HBV转录复制依赖于NF-κB。结论:多黏菌素B通过下调NF-κB进而抑制HBV Sp2启动子活性,最终抑制HBV转录复制。