检测猪繁殖与呼吸综合征病毒及鉴别类NADC30毒株的双重荧光定量PCR方法

作     者：周茜 于孔森 林青青 李玮卓 李文霞 余琦 王秋霞 陈蕾 王永强 ZHOU Xi;YU Kong-sen;LIN Qing-qing;LI Wei-zhuo;LI Wen-xia;YU Qi;WANG Qiu-xia;CHEN Lei;WANG Yong-qiang

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 河南科技学院动物科技学院河南新乡453003 泰州蕾灵百奥生物科技有限公司江苏泰州225300 北京市动物疫病预防控制中心北京100013 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第4期

页      面：462-467页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(32102680) 江苏省科学技术厅基础研究计划项目(BK20200931)。 

主　　题：猪繁殖与呼吸综合征病毒 类NADC30毒株 TaqMan探针 荧光定量PCR 鉴别检测 

摘      要：为建立可同时检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守区和类NADC30毒株的双重TaqMan探针荧光定量PCR方法,分别针对保守的N蛋白基因和Nsp2基因设计特异性引物和探针,通过优化反应体系及反应条件对该方法的灵敏度、特异性、重复性进行评估。结果显示,双重标准曲线的相关系数(R^(2))均大于0.990,具有良好的线性关系;最低检测限分别为5.27 copies/μL和3.00 copies/μL,具有较高的灵敏度;不与其他常见猪病病原发生非特异反应,且重复性良好,批内批间变异系数均小于3%。对168份临床样本的检测结果显示,PRRSV总阳性检出率为68.45%(115/168),其中类NADC30检出率为32.14%,混合感染率为20.24%,与临床诊断结果相一致。结果表明,本方法可用于检测PRRSV和鉴别类NADC30毒株以及猪繁殖与呼吸系统综合征的流行病学调查。