α-11贾第素相互作用蛋白鉴定与验证

作     者：张晨烁 黄磊 唐瑜 王朋 陈亚澜 张柳 沈海娥 余源 田喜凤 王洋 ZHANG Chenshuo;HUANG Lei;TANG Yu;WANG Peng;CHEN Yalan;ZHANG Liu;SHEN Hai’e;YU Yuan;TIAN Xifeng;WANG Yang

作者机构：华北理工大学生命科学学院河北唐山063000 河北省唐山市弘慈医院 

出 版 物：《中国血吸虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Schistosomiasis Control)

年 卷 期：2023年第35卷第2期

页      面：155-162页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：河北省自然科学基金(H2017209143) 华北理工大学大学生创新创业项目(X2021079) 

主　　题：蓝氏贾第鞭毛虫 α-11贾第素 蛋白相互作用 酵母双杂交 双分子荧光互补 

摘      要：目的 鉴定并验证α-11贾第素的相互作用蛋白,为其功能研究提供实验依据。方法 构建C2株蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和α-11贾第素诱饵质粒,通过酵母双杂交筛选出可能与α-11贾第素相互作用的蛋白。将α-11贾第素和筛选出的可能互作蛋白基因分别构建入pBiFc-Vc-155、pBiFc-Vn-173质粒,共转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过双分子荧光互补(bimolecular fluorescent complementation,BiFC)实验验证两种蛋白的相互作用。结果 构建了库容为2.715×10~7细菌菌落总数(CFU)的蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交cDNA文库和含有α-11贾第素基因的无自激活活性的诱饵质粒。通过酵母双杂交两轮阳性筛选,共筛选出6个可能与α-11贾第素相互作用的蛋白,分别为真核翻译起始因子5A(eukaryotic translation initiation factor 5A,EIF5A)、钙调蛋白激酶(calmodulin-dependent protein kinase,CAMKL)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸特异性谷氨酸脱氢酶(NADP-specific glutamate dehydrogenase,NADP-GDH)、假设蛋白1(GL50803_95880)、假设蛋白2(GL50803_87261)和一段来自犬贾第虫病毒的蛋白。成功将α-11贾第素基因与EIF5A基因分别转入BiFc系统质粒p BiFc-Vc-155与pBiFc-Vn-173,将矫正突变的pBiFc-Vc-155-α-11与pBiFc-Vn-173-EIF5A重组质粒共转染MDA-MB-231细胞后,镜下观察可见绿色荧光,证实α-11贾第素与EIF5A蛋白在细胞内存在相互作用。结论 成功构建了C2株蓝氏贾第鞭毛虫酵母双杂交文库,并鉴定出6个α-11贾第素可能的相互作用蛋白,其中EIF5A与α-11贾第素在细胞内存在相互作用。