AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

作     者：丁银巧 张文杰 张云霞 赵铁柱 孙明 遇秀玲 赵德明 田克恭 DING Yin-qiao;ZHANG Wen-jie;ZHANG Yun-xia;ZHAO Tie-zhu;SUN Ming;YU Xiu-ling;ZHAO De-ming;TIAN Ke-gong

作者机构：中国农业大学动物医学院北京100193 中国动物疫病预防控制中心兽医诊断室北京100193 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2009年第36卷第7期

页      面：63-67页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家"十五"科技攻关计划"口蹄疫防治科技攻关"项目资助(2004BA519A-40) 

主　　题：AsiaⅠ型口蹄疫病毒 VP1基因 杆状病毒 真核表达 

摘      要：利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。