基于噬菌体展示技术筛选抑制素α亚基特异性纳米抗体

作     者：马继福 阿德力·克坦 解津刚 巴合提·博代 李振伟 吾热力哈孜·哈孜汗 MA Jifu;Adil·Ketan;XIE Jingang;Bakhet·Bodai;LI Zhenwei;Oralhazi·Hazikhan

作者机构：石河子大学动物科技学院石河子832000 新疆塔城地区动物疾病控制与诊断中心塔城834700 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第50卷第5期

页      面：2032-2043页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071009[理学-细胞生物学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：兵团国际科技合作项目(2020BC008) 新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室开放课题(MYSKLKF201903) 

主　　题：抑制素α亚基(INHα) 纳米抗体 噬菌体展示技术 

摘      要：【目的】通过噬菌体展示技术构建抗抑制素α亚基(INHα)纳米抗体文库,并筛选出针对绵羊INHα的特异性纳米抗体,以期制备出新型抑制素免疫制剂,为提高绵羊外周血促卵泡素(FSH)水平和排卵率做前期准备。【方法】利用pET32a-INHA原核表达载体诱导表达INHα蛋白,并对诱导表达的INHα蛋白进行SDS-PAGE和Western blotting鉴定;用Ni琼脂糖凝胶纯化后的INHα蛋白免疫新疆双峰驼。通过巢式PCR扩增制备骆驼噬菌体展示纳米抗体文库,通过三轮免疫亲和淘选及噬菌体ELISA从该文库中富集和筛选INHα特异性纳米抗体,并通过测序得知纳米抗体的基因序列;用蛋白-蛋白模拟对接初步鉴定该纳米抗体与INHα蛋白的亲和性。【结果】通过原核诱导表达及Ni琼脂糖凝胶纯化得到了大小为36 ku的INHα重组蛋白,通过Western blotting检测到约36 ku的蛋白条带;双峰驼通过6次INHα蛋白免疫抗体效价达到1∶1024000;通过巢式PCR获得了400 bp左右的VHH基因,通过电转化等试验构建了库容量为1.05×10^(12)CFU的纳米抗体文库,文库阳性率为94%;通过三轮免疫亲和淘选获得3.0×10^(8)CFU的抗INHα纳米抗体文库,利用噬菌体ELISA获得了4株(VHH-4、VHH-29、VHH-89、VHH-108)INHα特异性纳米抗体,且4株INHα特异性纳米抗体基因序列相似度为80.31%;通过蛋白-蛋白模拟对接鉴定发现4株纳米抗体均与INHα具有较强的亲和性。此外,VHH-4与INHα的总自由能为-576.28 kJ/mol,是4种VHH中的最佳抗体。【结论】成功构建了抗INHα纳米抗体库,并从该库中获取了VHH-4、VHH-29、VHH-89和VHH-1084株INHα特异性纳米抗体。本研究结果可为纳米抗体在生殖免疫学中的应用提供参考。