3种蚊媒病毒快速荧光PCR检测方法与性能评价

作     者：徐聪灵 王静 杨绪理 陈峰 刘文干 耿合员 XU Congling;WANG Jing;YANG Xuli;CHEN Feng;LIU Wengan;GENG Heyuan

作者机构：连云港海关连云港222042 南通海关南通226005 安徽安龙基因科技有限公司合肥230000 江苏国际旅行卫生保健中心(南京海关口岸门诊部)南京210019 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2023年第39卷第3期

页      面：743-751页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：连云港海关(原连云港出入境检验检疫局自立项课题)(项目号:LYG2017KJ06) 题目:基于微流控荧光PCR技术的重要蚊媒传染病检测试剂的研究 

主　　题：快速荧光PCR检测 蚊媒病毒 

摘      要：建立寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)、登革病毒(Dengue virus,DENV)和黄热病毒(Yellow fever virus,YFV)3种蚊媒传染病核酸快速实时荧光定量检测方法。以寨卡病毒polyprotein gene基因,登革病毒NS5基因,黄热病毒3’UTR基因作为靶区域设计相应的引物探针,探针的5’端分别标记不同的荧光基团,3’端标记相应的淬灭基团,对扩增体系中引物探针浓度、热启动Taq酶浓度、逆转录酶浓度、RNA酶抑制剂浓度分别进行优化。构建了一种可同时用于寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒三重快速荧光PCR检测体系,25μL扩增体系中ZIKV、DENV和YFV的引物浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和240 nmol/L;探针浓度分别为200 nmol/L、240 nmol/L和80 nmol/L;热启动Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的终浓度为分别为2.5U/反应、60U/反应和80U/反应。该检测体系对3种病原体的最低检测限均为1.0×10^(3)拷贝/mL,在MIC IAT C2-48和ABI7500两种不同型号的实时荧光定量PCR仪上检测结果一致,对登革热、寨卡和黄热病毒血清样本检测均为阳性扩增,与丙型肝炎病毒、乙型脑炎病毒、副流感病毒、腺病毒等无交叉反应。因此,本研究建立的寨卡病毒、登革病毒和黄热病毒的三重快速荧光PCR检测体系可用于对上述3种病毒的定性或定量检测。