二甲双胍对急性肺损伤细胞凋亡、迁移和上皮-间质转化的影响及机制研究

作     者：欧阳运萍 陈涛 李鹏 赵博 杨小军 OUYANG Yunping;CHEN Tao;LI Peng;ZHAO Bo;YANG Xiaojun

作者机构：河北省唐山市协和医院急诊科063000 河北省唐山市协和医院消化内科063000 河北省唐山市协和医院重症医学科063000 

出 版 物：《实用心脑肺血管病杂志》 (Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease)

年 卷 期：2023年第31卷第5期

页      面：68-74页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：2022年度河北省医学科学研究课题项目(20221833)。 

主　　题：急性肺损伤 肺泡上皮细胞 二甲双胍 细胞凋亡 细胞迁移 上皮-间质转化 p38丝裂原活化蛋白激酶类 

摘      要：目的探讨二甲双胍对急性肺损伤细胞凋亡、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响及机制。方法本实验时间为2022年6—11月。将人肺泡上皮细胞(A549细胞)分为对照组、过氧化氢(H_(2)O_(2))组、2.5 mmol/L二甲双胍组、5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组,对照组不做任何干预;H_(2)O_(2)组加入400μmol/L H_(2)O_(2)作用24 h,以构建急性肺损伤细胞模型;2.5 mmol/L二甲双胍组、5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组在H_(2)O_(2)组基础上分别加入2.5、5.0、10.0 mmol/L二甲双胍进行干预;SB203580组在H_(2)O_(2)组基础上加入10.0 mmol/L p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂——SB203580进行干预,选取细胞活力最佳时的药物浓度进行后续实验。将A549细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组、抑制剂组和激活剂组,对照组、H_(2)O_(2)组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组干预方法同前,抑制剂组和激活剂组在10.0 mmol/L二甲双胍组基础上分别加入10μmol/L SB203580和10μmol/L p38 MAPK信号通路激活剂——C16-PAF。采用CCK-8法测定对照组、H_(2)O_(2)组、2.5 mmol/L二甲双胍组、5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组细胞活力。采用Hoechst 33258染色法测定对照组、H_(2)O_(2)组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组、抑制剂组、激活剂组细胞凋亡率,划痕试验测定细胞迁移率,RT-qPCR法测定EMT相关因子〔E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、波形蛋白、纤维连接蛋白(FN)〕mRNA相对表达量,Western blot法测定EMT相关因子蛋白及p38 MAPK信号通路相关蛋白(p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK)相对表达量。结果H_(2)O_(2)组细胞活力低于对照组,5.0 mmol/L二甲双胍组、10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组细胞活力高于H_(2)O_(2)组,10.0 mmol/L二甲双胍组细胞活力高于5.0 mmol/L二甲双胍组(P0.05),选取10.0 mmol/L二甲双胍进行后续实验。H_(2)O_(2)组细胞凋亡率、细胞迁移率,N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相对表达量,磷酸化p38 MAPK相对表达量高于对照组,E-钙黏蛋白mRNA和蛋白相对表达量低于对照组(P0.05);10.0 mmol/L二甲双胍组、SB203580组细胞凋亡率、细胞迁移率,N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相对表达量,磷酸化p38 MAPK相对表达量低于H_(2)O_(2)组,E-钙黏蛋白mRNA和蛋白相对表达量高于H_(2)O_(2)组(P0.05);抑制剂组细胞凋亡率、细胞迁移率,N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相对表达量,磷酸化p38 MAPK相对表达量低于10.0 mmol/L二甲双胍组和SB203580组,E-钙黏蛋白mRNA和蛋白相对表达量高于10.0 mmol/L二甲双胍组和SB203580组(P0.05);激活剂组细胞凋亡率、细胞迁移率,N-钙黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相对表达量,磷酸化p38 MAPK相对表达量高于10.0 mmol/L二甲双胍组和SB203580组,E-钙黏蛋白mRNA和蛋白相对表达量低于10.0 mmol/L二甲双胍组和SB203580组(P0.05)。结论二甲双胍可抑制H_(2)O_(2)诱导的急性肺损伤的细胞凋亡、迁移和EMT,其作用机制可能与其抑制p38 MAPK信号通路激活有关。