反式自主转运蛋白紧密黏附素Intimin离体重组系统的建立

作     者：韦良婉 王哲 王星媛 储引娣 范恩国 Wei Liangwan;Wang Zhe;Wang Xingyuan;Chu Yindi;Fan Enguo

作者机构：中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病原学系医学分子生物学国家重点实验室北京100005 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2023年第43卷第3期

页      面：191-195页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(32200153)。 

主　　题：反式自主转运蛋白 BAM蛋白复合物 跨膜转运 

摘      要：目的构建反式自主转运蛋白的离体重组系统,以用于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。方法以大肠埃希菌紧密黏附素Intimin为例,进行离体重组系统的构建。获得Intimin的过表达菌株后,将其制备成原生质球,诱导Intimin表达。纯化重组表达的桶状蛋白组装复合物,将其制备成蛋白脂质体。反应体系中加入蛋白酶K处理后,观察转运是否成功。结果原生质球诱导表达未折叠的Intimin后,向体系中加入桶状蛋白组装复合物制备的蛋白脂质体,反应结束后加入蛋白酶K处理。与不加蛋白脂质体的对照组相比,能观察到Intimin不被蛋白酶K消化,表明Intimin被成功转运至膜上。结论反式自主转运蛋白Intimin的跨膜转运需要桶状蛋白组装复合物的参与。本研究成功建立反式自主转运蛋白的离体重组系统,从而有助于深入研究反式自主转运蛋白的跨膜转运机制。