一种简易快速提取洋葱线粒体DNA的方法

作     者：刘杰 崔成日 李景鹏 

作者机构：东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 哈尔滨长日圆葱研究所哈尔滨150020 

出 版 物：《园艺学报》 (Acta Horticulturae Sinica)

年 卷 期：2003年第30卷第5期

页      面：553-553页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：黑龙江省科技厅国际合作项目 

主　　题：洋葱 线粒体 DNA方法 细胞质 雄性不育 

摘      要：以哈尔滨长日圆葱研究所提供的洋葱细胞质雄性不育系A为试材，取其块茎50 g剪碎，加入100 mL预冷的缓冲液A[30 mmol／L甘露醇，50 mmol／L Tris-HC1，3 mmol／L EDTA，0．1％BSA，10 mmol／L β-巯基乙醇(pH 8．0)](按1：2比例)，捣碎后，4层无菌纱布过滤，滤液1 500 g离心10min，弃沉淀，上清液12 000 g离心15 min，弃上清，加入10 mL缓冲液A悬浮沉淀，1 500 g离心10 min，弃沉淀。上清液加入1 mol／L MgCl_2终浓度10 mmol／L，DNaseⅠ至100μg/ mL，冰上放置1 h，然后加入3倍体积的缓冲液B(1．25 mol／L NaC1，50 mmol／L Tris-HCl，20 mmol／L EDTA(pn 8．0)]，轻轻混匀，12 000 g离心15 min，弃上清。沉淀悬浮于50 mL缓冲液c[50 mmol／L Tris-HCl，10 mmol／L EDTA(pH 8．0)]中，12(300 g离心15 min，弃上清，重复此步骤3次，沉淀用600μL缓冲液D[100 mmol／L NaCl，100mmol／L.