喜树CaSLS基因的克隆、表达分析和功能鉴定

作     者：王瑶 李雨桓 金朝霞 WANG Yao;LI Yuhuan;JIN Zhaoxia

作者机构：大连工业大学生物工程学院辽宁大连116034 

出 版 物：《大连工业大学学报》 (Journal of Dalian Polytechnic University)

年 卷 期：2023年第42卷第2期

页      面：79-84页

学科分类：0710[理学-生物学] 071001[理学-植物学] 07[理学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31970324) 

主　　题：喜树碱 裂环马钱子苷合酶 酵母 异源表达 

摘      要：对喜树碱合成途径中的关键酶——裂环马钱子苷合酶(CaSLS)的编码基因序列进行扩增,通过基因表达量分析和酵母异源表达进行功能鉴定。该基因大小为1575 bp,共编码524个氨基酸,编码蛋白理论分子质量为59.88 ku。构建表达质粒pESC-Leu2d-CaCPR1-CaSLS转入酵母菌株,通过HPLC-MS检测酵母提取物发现,CaSLS成功将底物马钱子苷和马钱子酸催化形成裂环马钱子苷和裂环马钱子酸,说明CaSLS基因表达的酶蛋白具有生物活性和催化功能。q-RT-PCR结果表明,CaSLS基因在植物体内的表达量呈明显的组织特异性和时空特异性,在嫩叶中表达量最高,在老茎中表达量最低,推测其主要在嫩叶中发挥作用。