乙型肝炎病毒X蛋白通过下调微RNA⁃223靶向NLRP3炎症小体促进乙型肝炎病毒相关性肾炎足细胞焦亡

作     者：余亚妮 陈月琪 李保爽 杨小倩 冯墨宣 蒋伟 Yu Yani;Chen Yueqi;Li Baoshuang;Yang Xiaoqian;Feng Moxuan;Jiang Wei

作者机构：青岛大学附属医院肾内科青岛266003 

出 版 物：《中华肾脏病杂志》 (Chinese Journal of Nephrology)

年 卷 期：2023年第39卷第1期

页      面：20-31页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81870494) 青岛市医疗卫生优秀人才培养项目(2020-2022) 中华医学会临床科研基金(20010080800)。 

主　　题：乙型肝炎病毒 微RNAs NLR家族,热蛋白结构域包含蛋白3 足细胞 焦亡 乙型肝炎病毒相关性肾炎 

摘      要：目的探讨微RNA(microRNA,miRNA)⁃223在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBV X protein,HBx)诱导的HBV相关性肾炎(HBV⁃associated glomerulonephritis,HBV⁃GN)足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法采用人肾足细胞中过表达HBx基因来模拟HBV⁃GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白[核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide⁃binding oligomerization domain⁃like receptor protein 3,NLRP3)、胱天蛋白酶1(Caspase⁃1)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis⁃associated speck⁃like protein containing a CARD,ASC)]及炎性因子[白细胞介素1β、白细胞介素18]mRNA和蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA⁃223的下游靶标;TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况;免疫荧光检测足细胞损伤标志物Desmin和Nephrin的表达;Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化;酶联免疫吸附测定检测Caspase⁃1活性。将足细胞分为以下9组:对照组(不予特殊处理)、空质粒组(转染空质粒)、HBx过表达组(转染HBx过表达慢病毒)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic组(共转染HBx过表达慢病毒和miRNA⁃223模拟物)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor组(共转染HBx过表达慢病毒和miRNA⁃223抑制剂)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic+NLRP3组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223模拟物和NLRP3过表达质粒)、HBx过表达+miRNA⁃223 mimic+NLRP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223模拟物和NLRP3 siRNA)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor+NLRP3组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223抑制剂和NLRP3过表达质粒)、HBx过表达+miRNA⁃223 inhibitor+NLRP3 siRNA组(共转染HBx过表达慢病毒、miRNA⁃223抑制剂和NLRP3 siRNA)。结果与对照组相比,HBx过表达组miRNA⁃223表达较低(P0.05)。TUNEL染色和免疫荧光结果显示,敲低NLRP3减弱HBx过表达引起的足细胞损伤和焦亡(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证明NLRP3是miRNA⁃223的下游靶点之一。功能回复实验证明,NLRP3过表达削弱了miRNA⁃223对足细胞损伤的保护作用(P0.05)。miRNA⁃223 mimic和NLRP3 siRNA的共同加入使HBx过表达诱导升高的NLRP3炎症小体及炎性因子表达下降,焦亡细胞数量减少(均P0.05);而同时引入miRNA⁃223 inhibitor和NLRP3过表达质粒则使足细胞中NLRP3炎症小体和炎性因子的表达上调,Caspase⁃1活性升高,焦亡细胞数量增加(均P0.05)。结论HBx可能通过下调miRNA⁃223靶向NLRP3炎症小体促进HBV⁃GN足细胞焦亡。miRNA⁃223有望成为治疗HBV⁃GN的潜在靶点。