马立克氏病病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：刘蔓蔓 温贵兰 李涛 李波 田兴舟 胡璇 孙芸 罗东还 赵静 徐飞 LIU Man-man;WEN Gui-lan;LI Tao;LI Bo;TIAN Xing-zhou;HU Xuan;SUN Yun;LUO Dong-huan;ZHAO Jing;XU Fei

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳550025 贵州省畜禽遗传资源管理站贵州贵阳550001 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第53卷第2期

页      面：170-175页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：贵州省科技支撑计划项目(黔科合支撑一般164) 贵州省级农业科技支撑计划项目(黔科合支撑2286) 贵州大学省级教学内容和课程体系改革项目(GZJG20200035) 贵州省地方家禽产业联合攻关项目(黔财农175号) 

主　　题：马立克氏病病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 

摘      要：根据马立克氏病病毒PP38基因的一段特异性保守序列设计引物,将MDV的PP38基因构建到19T载体上,将获得的重组质粒作为标准阳性模板,建立了针对马立克氏病病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行了评价。结果显示,所建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的Ct值与标准品在6.53×10^(1)~6.53×10^(8)copies/μL范围内呈良好的线性关系,其线性相关系数R^(2)=0.998 8,标准曲线方程为Y=-3.271X+39.297,熔解曲线呈现单峰,无非特异性扩增。且检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、禽流感病毒(AIV)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)时结果均呈阴性,具有良好的特异性。对20份临床组织样品检测结果进行分析发现,与普通PCR检测结果相比阳性率高出20%。本研究建立的检测MDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法可用于马立克氏病病毒的快速诊断,对马立克氏病的监测具有重要意义。