HIF-1α在奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的机制研究

作     者：苏月 郭勇 高玉平 肖龙菲 廖晨星 齐晓龙 盛熙晖 邢凯 王相国 倪和民 SU Yue;GUO Yong;GAO Yuping;XIAO Longfei;LIAO Chenxing;QI Xiaolong;SHENG Xihui;XING Kai;WANG Xiangguo;NI Hemin

作者机构：北京农学院动物科学技术学院北京102206 天津市蓟州区下仓镇人民政府天津301905 北京三元种业科技股份有限公司北京100076 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2023年第38卷第1期

页      面：202-209页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金青年项目(31802263) 现代农业产业技术体系北京市奶牛创新团队(BAIC05-2017)。 

主　　题：奶牛 滋养层细胞 缺氧 迁移 侵袭 HIF-1α 

摘      要：为探究HIF-1α在CoCl_(2)影响奶牛胎盘滋养层细胞迁移及侵袭变化中的作用,揭示奶牛胎盘在缺氧条件下的形成机制,从早期妊娠奶牛胎盘中分离纯化奶牛胎盘滋养层细胞(BTCs),用吉姆萨染色法观察细胞形态,免疫荧光法检测上皮细胞标志蛋白角蛋白7(CK7)、Thy/CD90蛋白表达,后将pCI-neo-hTERT质粒转染至BTCs,用qPCR和Western Blot法检测细胞TERT mRNA及蛋白表达,用CCK8法测定细胞增殖率,用ELISA法检测细胞分泌胎盘催乳素(PL)的能力,进一步利用siRNA沉默细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达,ELISA法检测细胞分泌血管内皮生长因子(VEGFA)能力,通过划痕试验及Transwell检测细胞迁移及侵袭能力。结果显示,分离纯化的BTCs为典型上皮样细胞,存在一定数量的双核细胞,并表达上皮细胞标志蛋白CK7,未见Thy/CD90表达,转染后的细胞可稳定表达端粒酶(TERT)mRNA及蛋白,连续传代50代未见细胞老化现象,且增殖率显著高于原代BTCs(P0.05)。经CoCl_(2)处理后发现,BTCs细胞活力随CoCl_(2)处理浓度及时间的增加而降低,HIF-1αmRNA及蛋白表达随CoCl_(2)浓度的增加而减少(P0.05),400μmol/L CoCl_(2)作用于BTCs 24 h建立缺氧模型,VEGFA分泌和迁移侵袭能力在BTCs缺氧状态下显著升高(P0.05),而将HIF-1α基因沉默后显著降低了BTCs分泌VEGFA和迁移侵袭能力(P0.05)。总之,通过外源性TERT基因转导建立了永生化的BTCs(Bovine trophoblast cells),永生化后的细胞具有与原代细胞相似的生物学特性,BTCs在缺氧条件下具有更强的VEGFA分泌能力及迁移侵袭能力,且与HIF-1α基因表达的上调有关。