人血管内皮生长因子受体Flt-1和KDR胞外区的表达及活性测定

作     者：李壮林 姚雪静 LI Zhuang-lin;YAO Xue-jing

作者机构：烟台荣昌生物工程有限公司山东烟台264006 

出 版 物：《药物生物技术》 (Pharmaceutical Biotechnology)

年 卷 期：2014年第21卷第2期

页      面：103-106页

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：血管新生 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体 复性 细胞增殖 肿瘤 

摘      要：血管新生在肿瘤发生过程中起着重要作用,VEGF通过与其特异性受体Flt-1、KDR结合参与了这一过程。该研究在大肠杆菌中分别表达了Flt-1 D2、KDR D3以及Flt-1 D2与KDR D3的融合蛋白FK,表达率依次占菌体中蛋白的24%,39%,35%,随后使用SPFF阳离子层析柱对溶解后的包涵体蛋白进行了纯化,并通过透析的方法进行复性获得活性蛋白。Flt-1 D2、KDR D3、FK与VEGF的结合都具有剂量依赖性,解离常数Kd值分别为13.8,38.8,2.7 pmol/L,表明FK比Flt-1及KDR更容易结合VEGF。使用HMEC和HUVEC两种内皮细胞测量了重组蛋白的生物活性,Flt-1 D2的IC50分别为12.51和15.77 nmol/L,KDR D3的IC50分别为24.37和28.83 nmol/L,而FK的IC50分别为1.46和2.63 nmol/L,表明FK能明显抑制VEGF165刺激的HMEC和HUVEC细胞增殖。该研究为肿瘤治疗提供了一个新的候选药物。