东方伊萨酵母羧酸转运蛋白基因的表达及功能验证

作     者：孙广玲 刘俊丽 吴迪 刘雨新 姜娇 宋育阳 Sun Guangling;Liu Junli;Wu Di;Liu Yuxin;Jiang Jiao;Song Yuyang

作者机构：西北农林科技大学葡萄酒学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学合阳葡萄试验示范站陕西合阳715300 西北农林科技大学宁夏贺兰山东麓葡萄酒试验示范站宁夏永宁750104 

出 版 物：《中国食品学报》 (Journal of Chinese Institute Of Food Science and Technology)

年 卷 期：2023年第23卷第2期

页      面：48-60页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 0836[工学-生物工程] 082203[工学-发酵工程] 0822[工学-轻工技术与工程] 083203[工学-农产品加工及贮藏工程] 

基　　金：国家重点研发计划项目(2019YFD1002500) 宁夏回族自治区重大研发计划项目(2020BCF 01003) 财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助项目(TGZX2019-27) 

主　　题：非酿酒酵母 绿色荧光蛋白 醋酸锂转化法 Cre-LoxP系统 有机酸 

摘      要：生物降酸是现代果酒绿色酿造的重要发展方向,目前关于部分羧酸转运蛋白及其转运调控机制仍不完整,严重限制了高效降酸菌株的定向选育。本试验以1株自主筛选的具有良好降酸能力的东方伊萨酵母GS1-1为材料,对其羧酸转运蛋白基因进行表达及功能验证。首先,利用NCBI上已有东方伊萨酵母基因组序列与被证明为不同羧酸转运蛋白的编码基因进行BLAST比对,获得5条候选羧酸转运蛋白基因,利用生物信息学进行基因比对、跨膜螺旋预测、构建系统进化树,并采用绿色荧光蛋白定位。构建单倍体酿酒酵母BY4741 ADY2、JEN1羧酸转运蛋白双缺失工程菌,将含候选片段的质粒在酿酒酵母中进行表型验证及特异性验证,发现目的片段4(OUT23260.1)为苹果酸羧酸转运蛋白,目的片段1(XP_029319440.1)是柠檬酸转运蛋白,目的片段发挥功能区域定位于酵母细胞膜上。本研究为探索发酵工程领域中非酿酒酵母降酸机理提供参考。