淋病奈瑟菌NGO2105蛋白660~1468肽段的表达纯化及多克隆抗体的制备与鉴定
Expression and purification of a peptide fragment of 660-1468 amino acids in Neisseria gonorrhoeae NGO2105 protein as well as preparation and identification of its polyclonal antibody作者机构：遵义医科大学附属医院检验科遵义563000 遵义医科大学附属医院输血科遵义563000
出 版 物：《中华皮肤科杂志》 (Chinese Journal of Dermatology)
年 卷 期：2023年第56卷第3期
页 面：216-221页
核心收录：
学科分类：1002[医学-临床医学] 100206[医学-皮肤病与性病学] 10[医学]
基 金：国家自然科学基金(81760358、82260330)
主 题：淋病奈瑟球菌 NGO2105蛋白 多克隆抗体 抗体亲和力 细菌黏附 免疫接种 疫苗
摘 要：目的原核表达淋病奈瑟菌NGO2105蛋白的660~1468肽段,制备并鉴定其多克隆抗体。方法将pCold TF-NGO2105_(660-1468 aa)重组质粒转化至*** BL21(DE3)菌中进行蛋白表达。包涵体蛋白经变性复性处理后纯化目的蛋白。目的蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清;采用ELISA法检测抗体效价,Western印迹分析抗体对淋病奈瑟菌中NGO2105蛋白的特异性,流式细胞仪分析抗血清与淋病奈瑟菌的亲和力,黏附抑制实验评估抗NGO2105_(660-1468 aa)抗体对淋病奈瑟菌对人宫颈上皮细胞ME-180细胞黏附作用的抑制能力。不同处理组间比较采用t检验。结果NGO2105_(660-1468 aa)蛋白以包涵体的形式呈现,通过变复性和纯化后得到了可溶性NGO2105_(660-1468 aa)蛋白,以该蛋白免疫小鼠后抗血清的效价为5.12×10^(6),流式细胞仪分析结果显示,该抗体能较好与淋病奈瑟菌的NGO2105_(660-1468 aa)片段结合。黏附抑制实验结果提示,相比未处理组的黏附率(100%),抗NGO2105_(660-1468 aa)抗体在20和40倍稀释时均能显著抑制淋病奈瑟菌的黏附作用(黏附率=52.9%、79.2%;t=8.40、5.29;P0.001、=0.006),呈现一定的浓度梯度依赖。结论成功表达及纯化出NGO2105_(660-1468 aa)肽段蛋白,制备出高效价的多克隆抗体,该抗体与淋病奈瑟菌有较好的亲和力且有黏附抑制能力。
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