壮药双路通脑方调节AMPK/mTOR信号通路对缺血-再灌注脑损伤大鼠神经元细胞自噬和凋亡的影响

作     者：梅小平 翟阳 王凯华 滕红丽 郑光珊 杨鹏 邹敏 

作者机构：广西中医药大学 广西国际壮医医院科技部 广西国际壮医医院儿科 广西国际壮医医院脑病科 广西国际壮医医院医务部 

出 版 物：《医药导报》 (Herald of Medicine)

年 卷 期：2023年

学科分类：1005[医学-中医学] 100513[医学-民族医学(含：藏医学、蒙医学等)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目（81874453） 广西壮族自治区中医药管理局自筹经费科研课题（20210360 20210506） 广西科技厅自然科学基金（2021JJB140540） 广西中医药重点学科中医脑病学（GZXK-Z-20-14） 广西国际壮医医院“青苗工程”人才培育项目资助 广西中医药大学第二批“岐黄工程”高层次人才团队培育项目（2021008） 广西国际壮医医院院级课题（GZ2021007 GZ2021052） 广西中医药大学校级青年基金项目（2018QN035） 

主　　题：壮药双路通脑方 缺血性脑卒 自噬 凋亡 腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路 

摘      要：目的 探讨壮药双路通脑方对缺血-再灌注（I/R）脑损伤大鼠神经元细胞自噬和凋亡的影响及潜在机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组，模型对照组，小、中、大剂量壮药双路通脑方组，大剂量壮药双路通脑方+AMPK激活剂AICAR组，每组18只。按照分组给予不同的药物干预7d后，采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型。再灌注24h后，评估大鼠神经功能缺损的程度；2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积；苏木精-伊红（HE）染色观察缺血半影区海马CA1区神经元形态学变化；TUNEL染色检测神经元凋亡；透射电子显微镜观察自噬小体的形成；免疫荧光（IF）染色检测微管相关蛋白1轻链3（LC-3）-Ⅱ的表达；Westernblot检测自噬标志基因Beclin-1、LC3A/B、p62及腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、Unc-51样激酶1（ULK1）及其磷酸化蛋白的表达。结果与假手术组比较，模型对照组神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、自噬小体数量、LC3-Ⅱ阳性表达、海马组织Beclin-1蛋白水平和LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK、p-ULK1（S317）/ULK1比值显著升高，p62蛋白水平和p-mTOR/mTOR、p-ULK1（S757）/ULK1比值显著降低（P0.05）；与模型对照组比较，小、中、大剂量壮药双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、自噬小体数量、LC3-Ⅱ阳性表达、海马组织Beclin-1蛋白水平和LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK、p-ULK1（S317）/ULK1比值显著降低，p62蛋白水平和p-mTOR/mTOR、p-ULK1（S757）/ULK1比值显著升高（P0.05），且呈剂量依赖性；AICAR可明显减弱大剂量壮药双路通脑方对脑I/R大鼠神经元自噬和凋亡的抑制作用。结论 壮药双路通脑方可能通过调控AMPK/mTOR信号通路，抑制神经元的过度自噬，减少神经元凋亡，进而对脑I/R大鼠发挥神经保护作用。