miR-365靶向调控USP22促进大肠癌细胞组蛋白修饰和EMT

作     者：孙梓程 陈海军 刘岩 范德标 尹中波 关红伟 SUN Zicheng;CHEN Haijun;LIU Yan;FAN Debiao;YIN Zhongbo;GUAN Hongwei

作者机构：南通市第六人民医院普外科南通226011 南通市第六人民医院病理科 南通市第六人民医院信息科 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2023年第54卷第2期

页      面：142-148页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：南通市卫健委科研课题立项项目(MB2019028) 

主　　题：miR-365 USP22 大肠癌 转移 

摘      要：目的探讨miR-365对大肠癌细胞组蛋白修饰和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及其机制。方法采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大肠癌细胞株(高转移细胞系HCT-116、LoVo和中低转移细胞系SW480)中miR-365 mRNA表达量。通过转染miRNA模拟物、抑制物构建miR-365过表达和敲低模型,SW480细胞分为miR-365模拟物组、miR-365抑制物组和NC组;采用RT-PCR检测miR-365和特异性泛素肽酶22(ubiquitin-specific peptidase 22,USP22)mRNA表达水平;采用双荧光素酶报告基因检测miR-365与USP22的相互作用;Western blot法检测Vimentin、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平;采用斑点杂交法检测H2A和H2B蛋白泛素化修饰;采用Transwell法检测各组细胞迁移情况,细胞划痕实验检测细胞转移能力。结果HCT-116和LoVo细胞系的miR-365 mRNA表达量显著低于SW480细胞系(P0.05)。RT-PCR法检测结果显示,与NC组比较,miR-365抑制物组SW480细胞中USP22 mRNA的表达量显著升高,而miR-365模拟物组则降低(P0.05)。斑点杂交法结果显示,与NC组比较,miR-365抑制物组H2AK119ub表达量显著升高,而miR-365模拟物组则降低(P0.05);与NC组比较,miR-365抑制物组H2BK120ub表达量显著升高,而miR-365模拟物组则降低(P0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,miR-365抑制物组SW480细胞中N-cadherin蛋白表达量显著降低,而miR-365模拟物组则升高(P0.05);与NC组比较,miR-365抑制物组SW480细胞中Vimentin、E-cadherin蛋白表达量显著升高,而miR-365模拟物组则降低(P0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组和miR-365模拟物组比较,miR-365抑制物组愈合率明显升高(P0.05);视野下miR-365抑制物组SW480细胞穿模数量明显高于NC组和miR-365模拟物组(P0.05)。结论miR-365可通过靶向调控USP22的表达,继而调节组蛋白泛素化修饰,诱导上皮-间质转化的发生,最终引起大肠癌细胞转移。