Lnc-TMEM132D-AS1高表达明显降低非小细胞肺癌对奥希替尼的敏感性

作     者：赵齐林 王楠 李亚霁 吴庆琛 吴兰香 ZHAO Qilin;WANG Nan;LI Yaji;WU Qingchen;WU Lanxiang

作者机构：重庆医科大学附属第一医院心胸外科重庆400016 重庆医科大学生命科学研究院重庆400016 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2023年第43卷第2期

页      面：242-250页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82073938) 重庆市自然科学基金(cstc2020jcyj-msxmX0246) 

主　　题：长链非编码RNA lnc-TMEM132D-AS1 NSCLC 奥希替尼 获得性耐药 

摘      要：目的建立奥希替尼获得性耐药非小细胞肺癌(NSCLC)细胞模型,筛选耐药前后差异表达的长链非编码RNA(lncRNAs),并探讨筛选的lncRNA在奥希替尼获得性耐药中的作用及分子机制。方法奥希替尼获得性耐药细胞株H1975_OR和HCC827_OR是由奥希替尼敏感的NSCLC细胞株H1975和HCC827(分别命名为H1975_S和HCC827_S)建立而来;通过CCK-8、克隆形成及流式凋亡实验检测细胞对奥希替尼的敏感性;RNA测序(RNA-seq)、实时荧光定量PCR(qPCR)技术筛选耐药前后差异表达的lncRNAs;采用CCK-8、克隆形成及Transwell实验检测所筛选的lncRNA在NSCLC细胞奥希替尼获得性耐药中的作用;通过核质分离、生物信息学分析及qPCR技术观察该lncRNA的亚细胞定位,并探索其下游互作分子。结果H1975_OR与HCC827_OR对奥希替尼的耐药指数分别为598.70和428.82(P0.001)。耐药株的生长增殖与克隆形成能力显著提高,而凋亡率降低(P0.01)。RNA-seq提示H1975_OR与H1975_S之间以及HCC827_OR与HCC827_S之间有共同差异表达的lncRNAs 34个。q PCR验证发现,lnc-TMEM132D-AS1在耐药性NSCLC细胞株中升高最为显著(P0.01)。TCGA数据库分析提示,lnc-TMEM132D-AS1在NSCLC组织中的表达水平高于癌旁组织(P0.001),且与患者预后不良相关(P0.05)。LncTMEM132D-AS1过表达可提高奥希替尼处理下敏感株的生长增殖、克隆形成及迁移能力(P0.05),而敲低其表达水平可部分恢复耐药株的奥希替尼敏感性(P0.01)。lnc-TMEM132D-AS1主要定位在胞质,生物信息学分析提示hsa-miR-766-5p是其潜在靶点,两者表达水平呈负相关(P0.01)。对hsa-miR-766-5p下游的靶mRNAs分析提示相关基因主要集中于Ras信号通路。结论Lnc-TMEM132D-AS1在奥希替尼获得性耐药NSCLC细胞株中表达显著上调,明显降低了NSCLC细胞对奥希替尼的敏感性,是NSCLC奥希替尼获得性耐药的潜在生物标志物及治疗靶标。