大鼠海马神经干细胞源性外泌体的提取与鉴定

作     者：陈珊 朱俊德 赵雪 龙婷婷 周璐 Chen Shan;Zhu Junde;Zhao Xue;Long Tingting;Zhou Lu

作者机构：贵州医科大学基础医学院人体解剖学教研室贵阳550025 

出 版 物：《神经解剖学杂志》 (Chinese Journal of Neuroanatomy)

年 卷 期：2022年第38卷第6期

页      面：657-663页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81660243) 贵州省科技厅自然科学基金(黔科合基础-ZK一般415) 贵州医科大学国家自然基金培育项目(20NSP006)。 

主　　题：神经干细胞 外泌体 细胞分化 提取及鉴定 大鼠 

摘      要：目的:探讨SD胎鼠海马神经干细胞(NSCs)源性外泌体(Exos)的提取、鉴定。方法:选取15 d胎鼠海马组织提取NSCs,首先光镜下观察细胞生长的形态变化,免疫荧光组织化学染色法检测巢蛋白(nestin)的表达;然后诱导分化培养基继续培养,行神经元特异性微管蛋白(β-tubulin-III)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光组织化学染色鉴定NSCs,最后收集细胞培养上清液,按照梯度离心方法提取、纯化Exos,电子显微镜下观察其形态特点,纳米颗粒分析检测其粒径大小,Western Blot检测其特异性标志物CD9、CD63、肿瘤易感基因101(TSG101)的表达。结果:成功分离、培养了SD胎鼠海马来源的NSCs,光镜下细胞呈典型神经球状生长,nestin表达阳性。NSCs经过诱导培养后成功分化为神经元和星形胶质细胞,β-tubulin-III与GFAP呈阳性表达。电子显微镜下Exos呈现双层膜的杯口状结构,平均粒径(171.8±67.6)nm,CD9、CD63与TSG101蛋白呈阳性表达。结论:分离并培养了15 d胎鼠海马来源的NSCs,成功提取NSCs来源的Exos。