抗布鲁氏杆菌Ⅳ型分泌系统表面蛋白VirB12纳米抗体的制备

作     者：熊婧璠 谢媛 张鑫 王飞 陈媛媛 李江伟 Xiong Jingfan;Xie Yuan;Zhang Xin;Wang Fei;Chen Yuanyuan;Li Jiangwei

作者机构：新疆大学生命科学与技术学院乌鲁木齐830046 新疆优迈生物技术有限公司乌鲁木齐830026 

出 版 物：《国际生物医学工程杂志》 (International Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2022年第45卷第4期

页      面：287-293页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31570935) 

主　　题：布鲁氏杆菌 VirB12 纳米抗体 噬菌体展示文库 热稳定性 

摘      要：目的制备能与VirB12抗原高亲和力结合的新疆双峰驼纳米抗体,为后续研究奠定基础。方法采用VirB12重组蛋白6次免疫新疆双峰驼,从外周血中分离得到淋巴细胞后提取总RNA,通过巢式PCR扩增VHH基因片段构建噬菌体VHH展示文库。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)固相亲和富集方法进行筛选。进行3轮亲和筛选后随机挑取出第2、3轮富集的克隆,ELISA分析可溶性表达的纳米抗体与VirB12蛋白的结合情况。经过序列测定和多重比对去除重复序列,最后得到个5非冗余序列,分别命名为D1、E6、H8、H9和H10。将筛选鉴定的5个纳米抗体基因转化WK6菌株,在16℃下进行胞间质可溶性表达,经Ni亲和柱纯化表达后,Western Blot和ELISA法检测纳米抗体与VirB12抗原的结合能力与热稳定性。结果经VirB12蛋白免疫后的血清抗体效价最少为1∶24000。从VirB12抗原免疫的新疆双峰驼淋巴细胞中获得了滴度为2.8×108 cfu/ml的VHH噬菌体展示文库。5株纳米抗体在WK6菌中以可溶形式表达。结果表明,5株抗VirB12纳米抗体质量分数接近90%,且具有较高的抗原结合活性与明显的抗原-抗体浓度相关性;4株纳米抗体均表现出较高的热稳定性,在90℃处理后,仍能保留60%以上的结合活性。结论通过固相筛选富集和可溶性单克隆检测鉴定获得了5株具有较高亲和力和热稳定性的抗VirB12纳米抗体,为VirB12纳米抗体的进一步开发奠定了基础。