弓形虫泛素特异性蛋白酶TgUSP10的定位及其功能

作     者：陈璐璐 孙洪超 阳毅敏 盛楷茵 姚晨倩 陈学秋 杨怡 杜爱芳 CHEN Lulu;SUN Hongchao;YANG Yimin;SHENG Kaiyin;YAO Chenqian;CHEN Xueqiu;YANG Yi;DU Aifang

作者机构：浙江大学动物科学学院、浙江省动物预防医学重点实验室/浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310012 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江杭州310021 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第12期

页      面：2444-2451页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(31802183,31672543) 浙江省自然科学基金资助项目(LQ21C180002)。 

主　　题：弓形虫 去泛素化酶 TgUSP10 CRISPR/Cas9 

摘      要：利用CRISPR/Cas9技术构建弓形虫泛素特异性蛋白酶TgUSP10的内源性标记虫株,经单克隆后通过PCR和Western blot对内源性标记虫株进行鉴定,并通过间接免疫荧光试验分析了TgUSP10蛋白的亚细胞定位与表达水平;同时,构建TgUSP10敲除虫株,经单克隆后进行PCR鉴定,并通过噬斑、黏附/入侵、复制和逸出试验评估TgUSP10缺失对弓形虫体外增殖的影响。IFA结果显示,TgUSP10定位于细胞质,并在G1期、S期和分裂后期表达量较高;成功构建了TgUSP10敲除虫株,与RH△ku80虫株相比,TgUSP10敲除虫株形成噬斑的能力显著减弱;进一步分析体外增殖的具体过程后发现,TgUSP10敲除虫株的复制能力显著减弱,而黏附/入侵和逸出能力没有显著变化。结果表明,成功构建了TgUSP10的内源性标记虫株,TgUSP10定位于虫体细胞质,并对弓形虫体外增殖具有重要作用,为后续进一步阐明其功能和作用机制奠定基础。