猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型和3型多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

作     者：肖婷 何颖 赵硕 蒋家霞 陈忠伟 郭旋 卢冰霞 林昌华 赵武 秦毅斌 段群棚 全琛宇 许心婷 陈婷婷 许艺兰 胡庭俊 张宁 XIAO Ting;HE Ying;ZHAO Shuo;JIANG Jia-xia;CHEN Zhong-wei;GUO Xuan;LU Bing-xia;LIN Chang-hua;ZHAO Wu;QIN Yi-bin;DUAN Qun-peng;QUAN Chen-yu;XU Xin-ting;CHEN Ting-ting;XU Yi-lan;HU Ting-jun;ZHANG Ning

作者机构：广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 广西农垦永新畜牧集团新兴有限公司广西柳州545000 广西农垦永新畜牧集团金光有限公司广西南宁530042 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司广西贵港537100 广西桂垦牧业有限公司广西南宁530022 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第44卷第2期

页      面：8-14页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：柳州市科技计划项目(2020NACB0804) 南宁市科学研究与技术开发计划项目(20202090) 南宁市优秀青年科技人才项目(RC20190102) 贵港市科学研究与技术开发计划项目(桂科计2117003) 

主　　题：猪肺炎支原体 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 多重荧光定量PCR 

摘      要：为建立一种快速、特异的猪肺炎支原体(Mhp)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的多重荧光定量PCR鉴别检测方法,根据Mhp、PCV2和PCV3及β-actin基因保守区域序列,设计合成4对特异性引物及4种荧光基团标记的Taq Man探针。构建含有各目的基因的重组质粒标准品,筛选引物,优化反应条件,成功建立多重荧光定量PCR后评价该方法的特异性、敏感性、重复性并将该方法初步应用于临床样品检测。结果显示,该方法能同时特异性地鉴别检测Mhp、PCV2和PCV3,检测PRRSV、CSFV、PRV、JEV、PPV、PEDV、TGEV、FMDV病毒核酸无交叉反应;对Mhp、PCV2、PCV3和β-actin标准质粒的最小检出量分别为26.4、66.7、25.6、5990 copies/μL;该方法重复性好,组间和组内试验变异系数低于1.5%;用该方法检测101份临床样本,Mhp、PCV2和PCV3阳性率分别为20.8%、36.6%和33.7%。建立的多重荧光定量PCR方法能同时快速和定量检测Mhp、PCV2和PCV3,较普通PCR更敏感,实用性强,有效避免了多次检测耗时长、费用高的问题,为Mhp、PCV2和PCV3的监测和防控提供了可靠的检测技术。