自噬/Beclin1调节因子1通过Akt-Bad-Bcl-2通路降低乳腺癌化疗敏感性

作     者：孙蔚亮 罗婕 梁俐 王莉 赵璧 SUN Wei-liang;LUO Jie;LIANG Li;WANG Li;ZHAO Bi

作者机构：广西医科大学第二附属医院肿瘤内科广西南宁530007 

出 版 物：《中华肿瘤防治杂志》 (Chinese Journal of Cancer Prevention and Treatment)

年 卷 期：2023年第30卷第1期

页      面：20-29,35页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82160499) 广西自然科学基金(2018GXNSFAA281002)。 

主　　题：自噬/Beclin1调节因子1 蛋白激酶B Bad 乳腺肿瘤 化疗敏感性 

摘      要：目的检测自噬/Beclin1调节因子1(Ambra1)在乳腺癌中的表达及对化疗敏感性的影响,并探讨可能的机制。方法(1)临床标本测定:回顾性收集2018-03-01-2019-12-30在广西医科大学第二附属医院行手术切除的42例乳腺癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学方法检测Ambra1的表达。(2)细胞实验:通过Ambra1慢病毒表达载体(OE),使Ambra1在乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞高表达,以空载(Empty)作为对照。蛋白质印迹法分别检测细胞内Akt/pAkt、Bad/pBad^(s136)、Bcl-2和Bax的表达,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Akt mRNA表达;同时,细胞用紫杉醇(PTX)处理后,细胞计数盒8(CCK8)法和流式细胞术分别检测细胞存活和凋亡。为了研究pAkt的作用,细胞在感染OE的同时,使用GSK690693(GSK)抑制Akt磷酸化,蛋白质印迹法检测Bad/pBad^(s136)、Bcl-2和Bax表达,流式细胞术和CCK8法分别检测紫杉醇诱导的凋亡和细胞存活。结果(1)临床标本测定:Ambra1在乳腺癌组织中表达率为73.70%,高于正常乳腺组织(36.40%),差异有统计学意义,t=2.147,P=0.037。(2)细胞实验:感染了OE的MCF-7和MDA-MB-231细胞内Ambra1的相对表达量分别为1.07±0.09和0.63±0.04,高于Empty的0.25±0.03和0.22±0.02,差异有统计学意义,t值分别为8.801和10.132,均P0.05。而且OE组细胞内Akt/pAkt、pBad^(s136)、Bcl-2蛋白,以及Akt mRNA表达均高于Empty组,而Bax蛋白表达低于Empty组,差异有统计学意义,MCF-7的t值分别为13.132、11.672、4.828、7.163、4.596和-3.321,MDA-MB-231的t值分别为4.239、9.966、4.048、7.456、3.479和-9.181,均P0.05。PTX处理后,不同处理组间细胞凋亡率和存活率差异均有统计学意义(MCF-7的F值分别为291.608和19.110,均P0.001;MDA-MB-231的F值分别为339.698和15.459,均P0.001)。其中PTX+OE组细胞凋亡率均低于PTX组,而细胞存活率则高于PTX组,差异有统计学意义,均P0.05。Ambra1高表达(OE+),有或无GSK时pAkt、pBad^(s136)、Bcl-2及Bax蛋白表达的差异有统计学意义,均P0.001。GSK抑制Akt后,各处理组细胞的凋亡率和存活率差异均有统计学意义(MCF-7的F值分别为408.882和51.304,均P0.001;MDA-MB-231的F值分别为719.782和38.064,均P0.001)。其中,PTX+OE+GSK组细胞的凋亡率均高于PTX+OE组,而细胞存活率则低于后者,差异有统计学意义,均P0.001。结论Ambra1在乳腺癌中高表达,其通过Akt-Bad-Bcl-2通路抑制化疗药物诱导的细胞凋亡,降低化疗敏感性。