MALDI-TOF-MS高灵敏度分析EGFR基因多位点突变方法的建立与应用

作     者：黄海燕 孙杰 徐炜新 王姜琳 孙亚蒙 汪国庆 叶绍云 蒋峻峰 聂芳芳 徐军 王纯 HUANG Haiyan;SUN Jie;XU Weixin;WANG Jianglin;SUN Yameng;WANG Guoqing;YE Shaoyun;JIANG Junfeng;NIE Fangfang;XU Jun;WANG Chun

作者机构：上海健康医学院附属嘉定区中心医院检验科上海201800 上海柏辰生物科技有限公司上海200233 新起点生物科技(苏州)有限公司江苏苏州215123 上海健康医学院附属嘉定区中心医院肿瘤内科上海201800 

出 版 物：《检验医学与临床》 (Laboratory Medicine and Clinic)

年 卷 期：2023年第20卷第3期

页      面：334-338页

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

基　　金：上海市嘉定区农业和社会事业科研项目基金(JDKW-2019-W24) 

主　　题：MALDI-TOF-MS ddPCR EGFR基因 液态活检 

摘      要：目的以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)为分析平台,建立表皮生长因子受体(EGFR)基因多位点突变的高灵敏度同步检测方法,用于辅助临床伴随诊断。方法使用MALDI-TOF-MS推荐的网站设计引物和单碱基延伸引物(UEP),设计添加针对野生型基因组的blocker,以减少野生型模板对突变位点检测的干扰。用数字PCR定量标准品,使用定量后的标准品验证检测体系的灵敏度。收集228例非小细胞肺癌(NSCLC)患者的血液标本,比较MALDI-TOF-MS平台与微滴式数字PCR(ddPCR)平台检测结果的特异度、灵敏度。结果MALDI-TOF-MS检测E746_A750del位点、T790M位点突变灵敏度达0.1%,最小突变检出拷贝数达2.8;L858R位点突变灵敏度达0.5%,最小突变检出拷贝数达12。与ddPCR检测相比,MALDI-TOF-MS检测E746_A750del、L858R和T790M位点的灵敏度、特异度、Kappa值分别为94.4%(34/36)、99.5%(191/192)、0.95,94.6%(35/37)、100.0%(191/191)、0.97,83.3%(15/18)、99.5%(209/210)、0.87。结论MALDI-TOF-MS建立的检测方法具有很高的灵敏度,与ddPCR检测具有非常高的一致性,有广阔的临床应用前景。