豇豆血红蛋白Lb Ⅱ在大肠杆菌中的重组表达条件优化、纯化与鉴定

作     者：刘萌 王聪睿 刘波 赵祥忠 LIU Meng;WANG Congrui;LIU Bo;ZHAO Xiangzhong

作者机构：齐鲁工业大学(山东省科学院)食品科学与工程学院山东济南250353 

出 版 物：《食品工业科技》 (Science and Technology of Food Industry)

年 卷 期：2023年第44卷第4期

页      面：163-170页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083201[工学-食品科学] 

基　　金：山东省重点研发计划(重大科技创新工程2020CXGC010604) 

主　　题：豇豆 血红蛋白 响应面优化 重组表达 

摘      要：豇豆根瘤中含有大量豆血红蛋白。该蛋白是良好的天然色素,可用于人造肉的着色,本文将携带豇豆血红蛋白Lb Ⅱ基因的质粒p ET-15b转化进入大肠杆菌BL21中表达,并对表达条件进行优化。通过查找NCBI数据库得到一条全长456 bp的豇豆血红蛋白Lb Ⅱ的序列,以p ET-15b作为表达载体,大肠杆菌BL21-Codon Plus(DE3)-R-IL作为重组工程菌进行表达,成功表达出豇豆血红蛋白Lb Ⅱ,并使用镍柱层析对蛋白进行初步纯化,同时添加抗坏血酸为抗氧化剂。以IPTG浓度、温度、时间为自变量,Lb Ⅱ表达量为因变量进行单因素实验。结果表明,在IPTG终浓度为1.0 mmol/L、诱导温度为25℃,时间为14 h时,重组豆血红蛋白Lb Ⅱ的表达量最高,经SDS-PAGE凝胶电泳和可见光光谱分析法鉴定为目的蛋白Lb Ⅱ。经响应面试验优化后,表达量可以达到7.30μg/m L。本研究为后续使用工程菌发酵生产豆血红蛋白奠定了基础。