慢病毒介导RNA干扰Nogo受体基因治疗脊髓损伤的实验研究

作     者：吕碧涛 袁文 徐盛明 L(U) Bi-tao;YUAN Wen;XU Sheng-ming

作者机构：第二军医大学附属长征医院骨科上海200003 

出 版 物：《中华外科杂志》 (Chinese Journal of Surgery)

年 卷 期：2010年第48卷第20期

页      面：1573-1576页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471757) 

主　　题：慢病毒属 RNA干扰 脊髓损伤 Nogo受体 

摘      要：目的观察慢病毒介导RNA干扰大鼠神经元Nogo受体（NgR）基因表达对脊髓损伤的修复作用。方法将前期实验中构建好的针对NgR的特异性小干扰RNA系列siNgR199慢病毒重组体，按感染复数=3体外转染已培养好的大鼠皮层神经元细胞。荧光电镜观察慢病毒重组体的转染效率，采用实时荧光定量PCR检测NgR基因沉默效率，验证慢病毒重组体的有效性。建立大鼠重度脊髓损伤模型，大鼠分组后分别于大脑皮层运动区注射生理盐水、慢病毒重组体，采用BBB评分法观测大鼠后肢运动恢复情况，采用神经示踪法观察脊髓损伤区神经纤维生长情况。结果慢病毒重组体体外转染神经元细胞的效率〉99％，NgR基因沉默效率为61％。大鼠模型给药后8周，慢病毒重组体组大鼠脊髓损伤区可观察到神经纤维生长通过，而生理盐水组大鼠脊髓损伤区未见神经纤维生长通过，BBB评分结果提示慢病毒重组体组大鼠后肢运动功能恢复优于生理盐水组（P〈0．01）。结论慢病毒siNgR199重组体能够促进脊髓损伤区神经纤维的生长，在一定程度上促进脊髓损伤后大鼠后肢运动功能恢复。