套式聚合酶链式反应诊断三日疟原虫感染的临床应用

作     者：李瑾 徐超 魏庆宽 肖婷 孔祥礼 王用斌 张本光 魏艳彬 赵长磊 黄炳成 Li Jin;Xu Chao;Wei Qingkuan;Xiao Ting;Kong Xiangli;Wang Yongbin;Zhang Benguang;Wei Yanbin;Zhao Changlei;Huang Bingcheng

作者机构：山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所山东省疟疾诊断参比实验室济宁272033 

出 版 物：《中华诊断学电子杂志》 (Chinese Journal of Diagnostics(Electronic Edition))

年 卷 期：2014年第2卷第4期

页      面：270-274页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：山东省自然科学基金(2012 ZRC03040) 中国全球基金疟疾项目(201201055) 

主　　题：疟原虫,三日 核糖体亚单位 RNA,核糖体 聚合酶链式反应,套式 诊断 

摘      要：目的应用套式聚合酶链式反应(PCR)扩增小亚单位核糖体核糖核酸(SSUrRNA)基因诊断三日疟原虫感染,以减少三日疟的漏诊和误诊。方法分别提取可疑三日疟患者抗凝血DNA和对照间日疟、恶性疟患者抗凝血DNA,以此为模板,用疟原虫属特异性引物进行第一轮扩增;然后以第一轮扩增产物为模板,用4种疟疾的种特异性引物进行第二轮扩增,比较扩增出的18 SSU rRNA基因片段的大小,并对目的片段进行测序鉴定。结果经属特异性引物PCR扩增后,3个样本均出现大小约为1 200bp的条带。经种特异性引物PCR扩增后,间日疟及恶性疟确诊样本均扩增出相应的120bp和205bp特异性条带;可疑患者样本仅在用三日疟原虫种特异性作引物时扩增出144bp特异条带,与理论值相符,与Genbank标准序列对比显示,扩增片段大小及测序结果均完全正确。证实患者感染三日疟原虫。结论利用小亚单位核糖体核糖核酸基因片段三日疟种特异引物进行扩增可以用于诊断三日疟原虫感染。