人RGS22蛋白表达及多克隆抗体制备

作     者：胡艳秋 

作者机构：苏北人民医院生殖中心江苏扬州225001 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2011年第27卷第9期

页      面：997-999页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：江苏省教育厅创新基金(JX22013009) 国家自然科学基金资助项目(81000272) 

主　　题：蛋白表达 人RGS22蛋白 抗体制备 

摘      要：目的:构建人RGS22真核表达载体,表达人RGS22蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生和肿瘤转移中的作用。方法:以cDNA文库为模板,用PCR法扩增人的RGS22基因。将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-RGS22。将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达。表达产物用质谱鉴定。纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度。结果:用PCR法扩增出3 800 bp的RGS22基因编码框,测序证实为人RGS22基因,并在BL21菌中表达RGS22重组蛋白,用亲和层析N i柱进行纯化得到人RGS22蛋白。质谱分析其肽混合物的肽质量指纹谱,数据库检索证实为RGS22蛋白。用纯化的RGS22重组蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万。结论:制备了RGS22的多克隆抗体,为进一步研究RGS22在精子发生中的作用创造了有利条件。