人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化

作     者：谢来峰 张学成 罗坚 张伦 王海林 马小伟 XIE Lai-feng;ZHANG Xue-cheng;LUO Jian;ZHANG Lun;WANG Hai-lin;MA Xiao-wei

作者机构：华兰生物工程股份有限公司研发中心河南新乡453003 中国科学院过程工程研究所北京100190 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2022年第35卷第10期

页      面：1205-1209,1218页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100215[医学-康复医学与理疗学] 10[医学] 

主　　题：人纤维蛋白原 干热灭活 质量 Sindbis病毒 脑心肌炎病毒 

摘      要：目的 评价人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化。方法 取3批人纤维蛋白原样品,按样品与病毒9∶1的体积比分别加入Sindbis病毒和脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV),冻干后,于(99.5±0.5)℃下干热灭活30 min。96孔微量细胞病变法测定病毒滴度降低量,考察人纤维蛋白原干热灭活效果;并对干热前/后样品进行可见异物、稳定性、纯度、凝固活力、SDS-PAGE、高效液相分子排阻色谱(high performance liquid chromatography-size exclusion chromatography,HPLC-SEC)、圆二色光谱、荧光光谱、差示扫描荧光(differential scanning fluorimetry,DSF)分析,以评价其质量变化。结果 3批人纤维蛋白原样品干热30 min,Sindbis病毒滴度降低量分别为6.13、5.88、6.00 LgTCID_(50)/0.1 mL,EMCV滴度降低量分别为≥4.94、≥4.68、≥5.00 LgTCID_(50)/0.1 mL。3批人纤维蛋白原样品干热前/后,可见异物、稳定性试验均合格;SDS-PAGE分析可见相对分子质量约65 000、56 000和47 000的目的蛋白条带,未见裂解条带;纯度均值分别为(87.7±0.9)%和(87.7±1.5)%,活力均值分别为(18±0.8)和(18±0.5)s,HPLC纯度均值分别为(86.16±1.60)%和(86.36±0.67)%,最大荧光发射光谱均值分别为(341.9±0.2)和(342.1±0.2)nm,热转变中点温度1(mid point tem-perature of thermal transition 1,Tmid 1)均值分别为(47.84±0.09)和(47.36±0.36)℃,Tmid 2均值分别为(52.34±0.15)和(52.19±0.33)℃,差异均无统计学意义(P 0.05);α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲结构比例均值差异无统计学意义(P 0.05)。结论 干热灭活可对人纤维蛋白原进行有效病毒灭活,灭活后质量未发生变化。