微RNA-124-3p通过芳香烃受体激活β-联蛋白通路调控胃癌细胞增殖和侵袭的机制

作     者：王斯炜 张吉翔 董卫国 Wang Siwei;Zhang Jixiang;Dong Weiguo

作者机构：武汉大学人民医院消化内科武汉430061 

出 版 物：《中华消化杂志》 (Chinese Journal of Digestion)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      面：619-626页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金 (82170549)。 

主　　题：微RNA-124-3p 胃肿瘤 受体,芳基烃 生物标记 细胞凋亡 

摘      要：目的探讨微RNA(miR)-124-3p及其靶向基因芳香烃受体(AHR)在胃癌诊断和预后评估中的价值,及其调控胃癌细胞增殖和侵袭的相关分子机制。方法基于癌症基因组图谱数据库和基因型组织表达数据库获得miR-124-3p在胃腺癌患者的临床和预后特征,通过生物信息学分析miR-124-3p水平高低与不同病理分期、TNM分期、总生存期、无病生存期和无进展间期胃腺癌患者的关系。由Target Scan 7.1网络工具预测miR-124-3p与互作分子AHR mRNA的作用位点,通过小鼠皮下成瘤实验、免疫组织化学染色、双荧光素酶检测、实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、蛋白质印迹实验验证miR-124-3p在AHR mRNA中的靶结合位点。选择9只4~6周龄、体重为(18.43±0.29)g的雄性Balb/c裸小鼠,分别由小鼠尾静脉注射miR-124-3p模拟物(miR-124-3p组)、阴性对照模拟物(阴性对照组)和0.9%氯化钠溶液(氯化钠对照组),用miR-124-3p模拟物、阴性对照模拟物和0.9%氯化钠溶液转染胃癌细胞(MKN-45、AGS),分析生物学实验中3组小鼠AHR和连环蛋白β1基因(CTNNB1)的mRNA表达水平,AHR和β-联蛋白的蛋白质表达水平,以及miR-124-3p对转染的胃癌细胞增殖和侵袭的影响。统计学方法采用Pearson相关分析和Holm-Sidak法校正的多重t检验。结果miR-124-3p低表达与胃腺癌患者严重的病理分期、TNM分期均呈正相关(R^(2)=0.83、0.86,P=0.031、0.023);miR-124-3p高表达与总生存期、无病生存期和无进展间期延长均呈正相关(R^(2)=1.00、0.99、0.99,P=0.029、0.044、0.049)。小鼠皮下成瘤实验结果显示,miR-124-3p组瘤体内的凋亡细胞数多于阴性对照组和氯化钠对照组[(43.33±1.86)/高倍视野比(20.00±1.73)/高倍视野、(18.67±1.76)/高倍视野],差异均有统计学意义(t=8.55、8.33,P=0.013、0.014)。免疫组织化学染色结果显示,miR-124-3p组小鼠体内肿瘤组织的AHR蛋白质的光密度低于阴性对照组和氯化钠对照组(0.081±0.008比0.276±0.019、0.273±0.018),差异均有统计学意义(t=9.06、7.51,P=0.012、0.017)。双荧光素酶检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的野生型AHR MKN-45细胞中荧光强度低于转染阴性对照模拟物的细胞(0.293±0.020比1.000±0.032),差异有统计学意义(t=18.56,P0.001)。RT-qPCR检测结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中AHR和CTNNB1的mRNA水平均低于未处理的MKN-45细胞(0.51±0.09比1.02±0.02、0.46±0.03比1.03±0.01),差异均有统计学意义(t=4.51、16.60,P=0.046、0.004)。蛋白质印迹实验结果显示,转染miR-124-3p模拟物的MKN-45细胞中的AHR和β-联蛋白的蛋白质相对表达量均低于转染0.9%氯化钠溶液和阴性对照模拟物的细胞(3332.94±81.25比9041.60±439.79、8276.54±562.52,2725.79±167.57比9701.94±410.02、8081.66±275.84),差异均有统计学意义(t=15.49、7.91、17.35、19.42,P=0.004、0.016、0.003、0.003)。结论miR-124-3p与胃癌诊断和预后相关,可通过负向调节AHR mRNA和蛋白质表达,进而下调CTNNB1 mRNA和β-联蛋白通路相关蛋白质表达,于体内外诱导胃癌细胞凋亡。因此,miR-124-3p可能成为胃癌诊断和预后评估的潜在标志物。