斑马鱼ddx27基因对tp53基因的调控作用

作     者：陈改拓 周志杰 周泽斌 包林珠 邱军强 李伟明 张庆华 CHEN Gaituo;ZHOU Zhijie;ZHOU Zebin;BAO Linzhu;QIU Junqiang;LI Weiming;ZHANG Qinghua

作者机构：上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室/上海海洋大学国家水生动物病原库上海201306 密歇根州立大学农业和自然资源学院美国密歇根东兰辛48824 

出 版 物：《华中农业大学学报》 (Journal of Huazhong Agricultural University)

年 卷 期：2022年第41卷第6期

页      面：201-207页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家重点研发计划“蓝色粮仓科技创新”专项(2019YFD0900102) 教育部留学回国人员科研启动基金(D-8002-15-0042) 水产动物疾病与基因编辑育种的平台建设和前沿科学研究(A1-3201-19-3013) 

主　　题：斑马鱼 ddx27 亚细胞定位 真核表达载体 tp53 

摘      要：为探究斑马鱼ddx27基因对tp53基因表达的影响,根据NCBI网站在线数据库中分析得到的ddx27基因编码序列(coding sequence,CDS),利用同源重组技术构建斑马鱼ddx27真核表达载体pCMV-3×Flagddx27。通过亚细胞定位试验和蛋白质免疫印迹技术验证ddx27基因的表达,并利用双荧光素酶试验验证ddx27基因的过表达对tp53基因转录活性的影响。结果显示,ddx27 CDS区及阳性克隆的电泳片段大小以及测序比对均与预期结果一致。蛋白质免疫印迹显示Ddx27重组质粒可正常表达,且蛋白大小与预测结果一致。亚细胞定位显示Ddx27蛋白表达于HEK293T细胞的细胞核中。而且,过表达pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体能够显著增强tp53启动子报告基因载体pGL3-tp53-Luc的活性,为对照组的1.8倍(P0.05)。以上结果表明,斑马鱼pCMV-3×Flag-ddx27真核表达载体构建成功,能够在哺乳动物的细胞核中表达,且ddx27基因可以促进tp53基因的表达。