Hippo-YAP信号通路通过Beclin1调控自噬参与血管平滑肌细胞表型转换的机制研究

作     者：刘超利 李桑柔 岳秀青 杨帆 陈睦虎 钟武 LIU Chaoli;LI Sangrou;YUE Xiuqing;YANG Fan;CHEN Muhu;ZHONG Wu

作者机构：西南医科大学附属医院急诊医学部四川泸州646000 

出 版 物：《临床急诊杂志》 (Journal of Clinical Emergency)

年 卷 期：2022年第23卷第12期

页      面：870-877页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：四川省科技厅重点研发项目(No:2022YFS0275) 西南医科大学附属医院博士科研启动基金(No:19085) 

主　　题：血管平滑肌细胞 表型转换 Yes相关蛋白 自噬 Beclin1 

摘      要：目的:探索Hippo-YAP信号通路与自噬在血管平滑肌细胞表型转换中的作用关系及其机制。方法:①培养小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),选取第4~8代用于实验,使用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,1×10^(-7)mol/L)处理24 h构建VSMCs表型转换模型,对照组细胞以同浓度的二甲基亚砜(DOSO)处理。②使用Western Blot、qRT-PCR技术在蛋白质及mRNA水平对YAP,VSMCs表型标志物OPN、α-SMA,以及自噬相关标志物LC3、P62、Beclin1进行检测。③分别构建YAP与Beclin1的小干扰RNA(siRNA)对其进行敲减,构建YAP的过表达质粒(pcDNA-YAP)对其进行过表达,使用WB与qRT-PCR验证各基因的表达变化。结果:(1)与对照组相比,AngⅡ处理后VSMCs收缩型标志物α-SMA表达下调、合成型标志物OPN表达上调,YAP及自噬相关标志物LC3Ⅱ、Beclin1表达上调、P62表达下调,在蛋白质及mRNA水平均差异有统计学意义。②与对照组相比,YAP siRNA转染后,VSMCs中YAP在蛋白质与mRNA水平出现明显下调;过表达YAP后,YAP的表达水平出现明显上调。③与单纯AngⅡ刺激组相比,在AngⅡ联合YAP siRNA组中,表型转换的发生及自噬相关标志物的上调明显受到抑制;而过表达YAP组中,表型转换的发生及自噬相关标志物的上调得到进一步增强。④与单纯AngⅡ刺激组相比,AngⅡ联合Beclin1 siRNA组中,表型转换的发生及自噬相关标志物的上调均受到抑制,但两组中YAP的表达变化差异无统计学意义。结论:在VSMCs发生表型转换过程中,自噬相关基因及YAP的表达均明显上调,且YAP可能通过增加Beclin1的表达促进自噬,从而参与表型转换的发生。