腺病毒介导的HSP70基因转染对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

作     者：虞卫 严煜 张裕东 倪庆 YU Wei;YAN Yu;ZHANG Yu-dong;NI Qing

作者机构：扬州市第一人民医院普通外科扬州225200 南通大学附属医院心胸外科南通226001 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2009年第30卷第12期

页      面：1344-1348页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：南通大学创新基金 

主　　题：热休克蛋白70 基因转染 心肌细胞 腺病毒载体 缺氧/复氧损伤 

摘      要：目的:研究热休克蛋白70(HSP70)基因转染对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:体外原代培养乳鼠心肌细胞,以携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的腺病毒载体(***)按不同感染倍数(MOI)感染体外心肌细胞,通过荧光显微镜、流式细胞仪观察所构建腺病毒的感染力和安全性;应用含有人HSP70基因的重组腺病毒(***70)进行体外感染,采用ELISA法、Western印迹法及免疫组化染色法检测HSP70基因在心肌细胞中的表达情况。利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,研究HSP70基因转染对心肌细胞的保护作用。结果:原代培养获得高纯度的乳鼠心肌细胞,随着MOI值升高,***的感染效率和基因表达增强,在MOI值为50时,***感染心肌细胞的效率高于90%,在MOI值为200时,未见心肌细胞的生长明显受抑;ELISA法、Western印迹法证实转染的心肌细胞在正常生理状态下,可高水平表达HSP70。免疫组化染色法结果显示,表达的HSP70主要分布于心肌细胞的胞质和胞核中;利用体外的缺氧/复氧损伤模拟在体的缺血/再灌注损伤,结果显示***70感染组的细胞活力、MTT代谢率、细胞凋亡率、心肌酶谱的变化等指标均优于对照组(P0.05)。结论:重组腺病毒***70能够在体外高效、安全地感染心肌细胞,并成功表达HSP70;HSP70高表达对体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有显著的保护作用。