龙柴方含药血清联合恩替卡韦对HepG2.2.15肝癌细胞中P-糖蛋白和PI3K/AKT信号通路的影响

作     者：郑雪 严展鹏 李堃 徐婷婷 王培 林琳 朱方石 ZHENG Xue;YAN Zhanpeng;LI Kun;XU Tingting;WANG Pei;LIN Lin;ZHU Fangshi

作者机构：南京中医药大学第三临床医学院江苏省南京市210028 江苏省中医药研究院 江苏省中西医结合医院 

出 版 物：《中医杂志》 (Journal of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2022年第63卷第23期

页      面：2272-2278页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：第三批江苏省老中医药专家学术经验继承工作(20SSC002 20SSC006) 

主　　题：慢性乙型肝炎 乙型肝炎病毒 龙柴方 恩替卡韦 P-糖蛋白 PI3K/AKT信号通路 

摘      要：目的观察龙柴方对恩替卡韦抗乙型肝炎病毒(HBV)效果的影响,并探讨可能作用机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组和龙柴方低、中、高剂量组,每组6只。龙柴方低、中、高剂量组大鼠分别给予龙柴方药液9.84、19.68、39.36 g/(kg·d)灌胃,空白组给予和龙柴方中剂量组等量生理盐水灌胃,连续给药7天后制备含药血清。将HepG2.2.15肝癌细胞分为空白对照组(等量培养基)、空白血清组(100%空白血清∶培养基=1∶9)、恩替卡韦组(15μmol/ml恩替卡韦∶培养基=1∶9)及恩替卡韦+龙柴方低、中、高剂量血清组(15μmol/ml恩替卡韦∶100%龙柴方低、中、高剂量含药血清∶培养基=1∶1∶8),培养24 h。MTT法检测各组细胞存活率,荧光定量PCR法测定HBV DNA表达量;ELISA法测定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达量;Western blot法检测P-糖蛋白(P-gp)、蛋白激酶B(AKT)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)蛋白表达。结果各组HepG2.2.15细胞存活率差异均无统计学意义(P0.05)。与空白血清组比较,恩替卡韦+龙柴方中、低剂量血清组HBV DNA水平、HBeAg表达量明显降低(P0.01)。与空白组对照比较,恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组HBsAg表达量降低(P0.05)。与空白血清组和恩替卡韦组比较,恩替卡韦+龙柴方低剂量血清组PI3K蛋白表达降低,恩替卡韦+龙柴方中剂量血清组PI3K、AKT、P-gp蛋白表达均降低,PTEN蛋白表达升高(P0.05或P0.01)。与恩替卡韦组+龙柴方高剂量血清组比较,恩替卡韦组+龙柴方中剂量血清组HBV DNA水平降低,PTEN蛋白表达升高(P0.05或P0.01)。结论龙柴方对恩替卡韦抗HBV产生增效作用,其机制可能与上调PETN蛋白,抑制PI3K/AKT信号通路,从而下调P-gp表达有关,且以中剂量效果最佳。