猪源IRAV的克隆、表达及单克隆抗体的制备
Cloning and Expression of Porcine Interferon-Regulated Antiviral Gene and Preparation of Monoclonal Antibodies作者机构:中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009
出 版 物:《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)
年 卷 期:2022年第30卷第5期
页 面:126-134页
学科分类:090602[农学-预防兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学]
基 金:国家自然科学基金(31872478 32102665 31760741)
摘 要:干扰素调节的抗病毒基因(IRAV)是近年来被发现的一种具有抗病毒活性的新型干扰素刺激基因,其对登革热病毒的增殖具有良好的抑制作用,但目前鲜有猪源IRAV基因的研究。本研究,从PK-15细胞中克隆了IRAV全长的cDNA。猪源IRAV cDNA全长为1241 bp,其中包含858 bp的开放阅读框,编码一个大小为285个氨基酸的多肽,定位于细胞质。将猪源IRAV蛋白在BL21(DE3)中诱导表达,经纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,最终获得5株分泌猪源IRAV单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2B10、2G12、2H1、5A8和2C5。将获得的分泌性抗IRAV单克隆抗体经Western blot和间接免疫荧光试验分析后,确定该抗体可以与PK-15细胞中过表达的猪源IRAV发生特异性反应。本研究成功制备针对猪源IRAV的单克隆抗体,为后续深入研究猪源IRAV的功能奠定了基础。