SMA模型小鼠骨髓间充质干细胞体外培养体系的建立

作     者：陈志衡 吴刘成 景谨 朱顺星 CHEN Zhiheng;WU Liucheng;JING Jin;ZHU Shunxing

作者机构：南通大学实验动物中心江苏南通226001 南通大学江苏省教育部神经再生重点实验室江苏南通226001 

出 版 物：《中国实验动物学报》 (Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica)

年 卷 期：2022年第30卷第5期

页      面：679-685页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071002[理学-动物学] 

主　　题：SMA小鼠 骨髓间充质干细胞 ASO 运动神经元存活2基因 细胞增殖 

摘      要：目的建立脊髓型肌萎缩症(SMA)小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSC)体外培养体系,研究反义寡核苷酸(ASO)对其生物学特性的影响,为深入研究SMA发病机制及药物筛选提供可靠的体内模拟工具细胞。方法选取刚出生4 d的SMA小鼠,CO_(2)窒息法处死后,于75%乙醇中浸泡,分离、纯化骨髓细胞。细胞荧光检测细胞表面标志物;RT-PCR及Western Blot研究ASO对运动神经元存活基因2(SMN2)外显子(exon7)列入水平以及运动神经元存活(SMN)蛋白表达量;EDU法和TUNEL法检测细胞增殖和凋亡能力。结果体外分离培养的SMA模型小鼠BMMSC具有贴壁生长、可以传代等特点;对P3代BMMSC进行细胞免疫荧光鉴定结果显示:CD44、CD29高表达,CD34、CD45低表达;转染ASO后细胞SMN2 exon7列入率显著上升以及SMN蛋白表达量显著上调,并显著促进细胞增殖能力,同时核内Gemini bodies(gems)数量也有所增多。结论成功建立SMA小鼠BMMSC体外培养体系,通过阳性药物ASO验证可促进BMMSC SMN2 exon7列入及SMN蛋白表达,为SMN2相关调控机制及药物筛选提供一种新的工具细胞。