微载体规模化培养草鱼鳔细胞以增殖Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒的工艺研究

作     者：杨玉茹 王英英 王庆 周文礼 尹纪元 石存斌 YANG Yuru;WANG Yingying;WANG Qing;ZHOU Wenli;YIN Jiyuan;SHI Cunbin

作者机构：天津农学院水产学院天津300384 中国水产科学研究院珠江水产研究所农业农村部渔药创制重点实验室广东省水产动物免疫与绿色养殖重点实验室广州510380 

出 版 物：《海洋渔业》 (Marine Fisheries)

年 卷 期：2022年第44卷第5期

页      面：577-588页

核心收录：

学科分类：0906[农学-兽医学] 09[农学] 

基　　金：国家重点研发计划(2019YFD0900103) 中国水产科学研究院中央公益性科研院所基本科研业务费专项(2020XT0403) 广东省基础与应用基础研究基金(2020A1515010327) 国家大宗淡水鱼产业技术体系(CARS-45) 广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金(2022KJ150,2022KJ119) 

主　　题：草鱼鳔细胞(CiSB) Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒 微载体培养 工艺优化 

摘      要：为优化草鱼(Ctenopharyngodon idella)鳔细胞(CiSB)细胞悬浮培养工艺,以提高基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)含量,利用Cytodex 1微载体悬浮培养系统规模化培养CiSB和Ⅱ型GCRV,对CiSB细胞初始接种密度、搅拌转速和微载体浓度等工艺参数进行摸索和优化。结果显示,在CiSB细胞贴壁期,以转速30 r·min^(-1)、每静置30 min搅拌2 min的间歇搅拌方式培养最佳,4 h后细胞贴附率可达96%以上;在微载体密度2 g·L^(-1)、细胞初始接种密度2×10^(5)个·mL^(-1)、搅拌速度30 r·min^(-1)的条件下,初始培养血清浓度设定为10%,培养3 d后更换50%的培养基并使血清浓度达到5%,可获得最佳的细胞生长效能。CiSB经消化转移放大至1 L,微载体上细胞贴附均匀、生长良好。接种Ⅱ型GCRV至规模化培养的CiSB细胞,拷贝数最高达6.2×10^(5)拷贝数·μL^(-1)。研究结果可为草鱼出血病疫苗的规模化生产工艺研究提供依据。