鸭疫里默氏杆菌Porin蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立与应用

作     者：包涛涛 鲜思美 顾庆林 杨倩 梁倩 杨先富 吴通奎 王正文 廖飞 BAO Taotao;XIAN Simeil;GU Qinglin;YANG Qian;LIANG Qian;YANG Xianfu;WU Tongkui;WANG Zhengwen;LIAO Fei

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 贵州省黔东南州农业农村局贵州黔东南56000 贵州省动物疫病研究所贵州贵阳550025 贵州农业职业学院贵州贵阳550000 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      面：1830-1837页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：贵州省农业攻关资助项目(黔科合支撑2506号) 

主　　题：鸭疫里默氏杆菌 Porin蛋白 ELISA 

摘      要：旨在建立一种新型可适用于鸭疫里默氏杆菌(RA)病抗体检测的间接ELISA方法。以血清2型RA贵州分离株为研究对象,将其微孔蛋白Proin编码的基因克隆至pET-32a载体,构建重组表达质粒pET-32a-porin,在*** BL21(DE3)中使用IPTG诱导后表达。以纯化后的Porin蛋白作为包被抗原,通过一系列条件的优化建立一种检测RA抗体的间接ELISA方法,对其性能进行综合评价。结果显示,该方法具有较好的敏感性、重复性及特异性,阳性血清经1∶6 400稀释后检测结果仍为阳性,批内变异系数(CV)在1.27%~4.90%之间,批间CV在2.59%~5.43%之间,该方法可特异性地检测出抗RA抗体,与禽流感病毒(AIV)H5亚型、AIV H7亚型、新城疫病毒(NDV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)及***阳性血清均无交叉反应,与商品化ELISA抗体试剂盒检测相比,两者符合率为97.26%。使用建立的ELISA方法对临床采集的801份样品血清开展抗体检测分析(626份为已免疫鸭传染性浆膜炎二价灭活疫苗“血清1型+血清2型的样品血清,175份为未免疫任何鸭传染性浆膜炎疫苗的样品血清),有564份为免疫抗体阳性,检出阳性率为90.01%(564/626),有36份为感染抗体阳性,检出阳性率为20.99%(36/175)。结果表明,本研究建立了一种新型可用于RA抗体检测的间接ELISA方法,为RA的血清学流行病学调查提供了新的检测方法。