体外中脑微环境下骨髓基质干细胞向多巴胺能神经元分化的实验研究

作     者：牛平 陈欢意 赵帅 杜迎春 NIU Ping;CHEN Huan-yi;ZHAO Shuai;DU Ying-chun

作者机构：沈阳军区总医院神经内科110016 

出 版 物：《中华神经科杂志》 (Chinese Journal of Neurology)

年 卷 期：2007年第40卷第10期

页      面：697-700页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：辽宁省自然科学基金课题资助项目(20052072) 

主　　题：间质干细胞 神经元 细胞分化 细胞因子类 培养基 

摘      要：目的应用中脑条件培养基与细胞因子联合诱导骨髓间质干细胞(MSCs)转化为多巴胺能(DA)神经元,探索体外诱导 MSCs 定向分化为 DA 能神经元的最佳条件。方法取雄性 Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,进行 MSCs 的体外培养和传代扩增。采用贴壁培养法使 MSCs 得到纯化。碱性成纤维生长因子(bFGF)预诱导后,依据加入的神经营养因子不同分为对照组及实验组[单唾液酸四己糖神经节苷脂(GM_1)组、胶质源性神经营养因子(GDNF)组、GDNF+GM_1组、GDNF+GM_1+中脑条件培养基组]。诱导过程中在倒置显微镜下观察细胞形态变化,分别在诱导第3、7天进行神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学检测。计数 NSE和 TH 阳性细胞数,并计算阳性细胞百分比。结果各实验组于诱导第3、7天见不同数量的 NSE、TH阳性神经元样细胞,GFAP 阴性。对照组及实验各组7 d 时 NSE 阳性细胞数(个/视野,n=10)分别为:对照组2.214±0.779,GM_1组22.014±3.624,GDNF 组31.345±2.850,GDNF+GM_1组40.314±4.203,GDNF+GM_1+中脑条件培养基组45.257±5.999。实验各组以 GDNF+GM_1+中脑条件培养基组 NSE 阳性细胞率最高,依次为 GDNF+GM_1组、GDNF 组、GM_1组,组间比较差异有统计学意义(P0.05)。单独应用 GDNF 和 GM_1不能诱导 MSCs 表达 TH,二者联合应用可诱导 MSCs 表达 TH,加入中脑条件培养基可使 TH 阳性细胞率明显增加,而且随着共培养时间的延长,TH 阳性表达增加更显著。结论中脑条件培养基与细胞因子联合可明显促进 MSCs 向神经元样细胞分化,并促进细胞表达 TH。