榨菜BjuFIP蛋白纯化及非生物胁迫下基因表达模式分析

作     者：颜论 陈国建 陈明飞 游经番 彭姣姣 程春红 YAN Lun;CHEN Guojian;CHEN Mingfei;YOU Jingfan;PENG Jiaojiao;CHENG Chunhong

作者机构：长江师范学院生命科学与技术学院重庆408100 

出 版 物：《福建农林大学学报（自然科学版）》 (Journal of Fujian Agriculture and Forestry University:Natural Science Edition)

年 卷 期：2022年第51卷第5期

页      面：606-612页

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：重庆市科技局项目(cstc2018jcyjAX0628) 重庆市教育委员会项目(KJQN202101432) 重庆市高校创新研究群体项目(CXQT21029). 

主　　题：榨菜 F-box蛋白 BjuFIP 基因表达 蛋白纯化 

摘      要：采用荧光定量PCR技术分析BjuFIP在不同非生物逆境胁迫下的表达模式.通过无缝克隆技术将BjuFIP的CDS序列构建到原核表达载体pGEX4T-1上,测序正确后转化大肠杆菌表达菌株BL21,对BjuFIP-GST蛋白进行体外诱导表达纯化.结果表明,BjuFIP-1显著受低温(4℃)、高温(37℃)和NaCl的诱导表达,BjuFIP-2显著受低温(4℃)、高温(37℃)、ABA、NaCl以及Mannitol的诱导表达,说明BjuFIP在调控榨菜响应非生物逆境胁迫过程中具有重要作用.SDS-PAGE电泳检测结果显示,在16、25和37℃以及1 mmol·L^(-1)IPTG诱导条件下,重组菌株均能够表达出分子质量约为55 ku的BjuFIP-GST融合蛋白,并且16℃诱导条件下,BjuFIP-GST蛋白较多以可溶性蛋白的形式存在,通过Glutathione Beads亲和层析柱纯化后,获得了大量纯度较好的BjuFIP-GST融合蛋白.BjuFIP显著受非生物逆境胁迫的诱导表达,在调控榨菜响应非生物逆境胁迫过程中具有重要作用,并且获得了大量纯度较高的BjuFIP-1-GST和BjuFIP-2-GST融合蛋白,为后期进一步探究BjuFIP在调控榨菜抗逆过程中的功能提供依据.