TRAF6通过内源性凋亡通路促进卡介苗诱导的巨噬细胞凋亡

作     者：马沁梅 刘莉 于嘉霖 宫照乾 王晓平 吴晓玲 邓光存 MA Qinmei;LIU Li;YU Jialin;GONG Zhaoqian;WANG Xiaoping;WU Xiaoling;DENG Guangcun

作者机构：西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏银川750021 宁夏大学生命科学学院宁夏银川750021 宁夏回族自治区第四人民医院宁夏银川750021 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2022年第42卷第9期

页      面：1279-1287页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(32060160,32160162) 宁夏自然科学基金(2022AAC02009) 

主　　题：TRAF6 卡介苗 巨噬细胞 细胞凋亡 内源性细胞凋亡 

摘      要：目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)对卡介苗(BCG)诱导巨噬细胞凋亡的调控作用。方法Q-PCR检测活动性结核患者外周血中TRAF6的表达后利用不同感染复数的BCG感染RAW264.7细胞,在感染的不同时间通过Q-PCR和Westernblot检测巨噬细胞中Caspase 3和TRAF6的表达。时间梯度试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、BCG感染6 h组、12 h组、18 h组和24 h组;感染复数试验处理组分为5组:对照组(未感染,C)、5 MOI组、10 MOI组、15 MOI组和20 MOI组。随后,通过小干扰RNA技术敲减RAW264.7细胞中TRAF6的表达,并结合BCG感染建立TRAF6敲减模型。TRAF6敲减实验分为4组:阴性对照组(NC)、BCG单独感染组(BCG)、TRAF6小干扰RNA单独处理组(siRNA)和TRAF6小干扰RNA与BCG共处理组(siRNA+BCG)。利用平板涂布法检测巨噬细胞菌载量变化。通过流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率和线粒体膜电位变化。利用Westernblot检测TRAF6、Caspase 3、PARP、Bcl-2,BAX的表达。使用免疫荧光技术检测TRAF6与Caspase 3的表达。结果与健康人群相比,活动性结核患者外周血中TRAF6高表达(P0.001)。BCG感染显著上调RAW264.7中TRAF6与Caspase 3的表达,且当感染时间为18 h(P=0.03,P=0.04),感染复数为15时二者表达量最高(P0.001,P0.001)。敲减TRAF6上调BCG感染的巨噬细胞内的菌载量(P=0.05)。与BCG单独处理组相比,敲减TRAF6显著抑制BCG感染的巨噬细胞凋亡率(P0.001),并显著下调Caspase 3(P=0.002)和PARP的表达(P0.001)。同时,BCG感染RAW264.7细胞的线粒体膜电位上升(P0.001),而敲减TRAF6抑制BCG感染的巨噬细胞线粒体膜电位(P0.001)。敲减TRAF6显著下调BCG感染巨噬细胞中BAX表达(P=0.005)的同时上调Bcl-2的表达(P=0.04)。结论TRAF6通过内源性凋亡通路促进BCG感染的巨噬细胞凋亡。