对虾白斑综合症病毒LAMP-Taqman检测方法的建立及应用

作     者：刘昱 柳梦思 董振国 焦义然 时国强 石磊 

作者机构：河北三狮生物科技有限公司 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2022年

学科分类：09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：河北省产业创新创业团队项目(205A7601D) 

摘      要：为提高环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法的特异性，本研究建立一种LAMP-Taqman检测方法，进行对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测。本研究以WSSV基因组中保守序列构建测试质粒并设计筛选LAMP引物组，以荧光淬灭集团修饰的环引物作为Taqman探针，建立LAMP-Taqman检测方法。结果显示，LAMP-Taqman法在WSSV检测中，具备良好的特异性，最适检测温度为63℃，测试质粒线性相关性系数R为0.990，最低检出限为0.76×10copies/μL，重复性检测结果的变异系数CV值均小于3%，稳定性良好。以市售检测试剂盒为对照，对60份对虾样品进行平行测试，LAMP-Taqman检测准确率为96.67%，敏感性为100.00%。建立的LAMP-Taqman恒温核酸检测方法具备精准快速，检出限低，有效避免LAMP非特异性扩增造成的“假阳性等优势，在水产疫病精准快速检测中具有广泛的市场应用前景。